体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）试剂盒资料
体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（tmrm）试剂盒资料
主要用途活体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（tmrm）测定试剂是一种旨在通过四甲基罗丹明甲酯染料，选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色，其荧光的增强或减弱说明线粒体膜电位的变化，即内膜电负性的增高或降低，来分析线粒体内膜功能的完整性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体制备物的功能检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老等的研究。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简易，性能稳定。
技术背景
体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（tmrm）试剂盒资料
四甲基罗丹明甲酯（tetramethylrhodamine methyl ester；tmrm），为罗丹明衍生物阳离子染料，作为电势测定（potentiometric）荧光探针：*，具有亲脂性，且细胞低毒和光稳定； 第二，与线粒体内膜负电极结合而聚集；第三，容易进入细胞及其线粒体。四甲基罗丹明甲酯进入细胞后，被细胞内酯酶切离，产生四甲基罗丹明。四甲基罗丹明进入线粒体后，被线粒体俘获，分布和结合在线粒体内膜上，呈现强烈荧光。线粒体膜电位的高低变化决定了tmrm的分布浓度。电位高，tmrm在线粒体的浓度高，显示为强力红色或桔红色；反之，tmrm弥散在胞浆内，荧光减弱表明线粒体膜电位受到损害。
产品内容
染色液（reagent a） 100微升
稀释液（reagent b） 10毫升
清理液（reagent c） 50毫升
强化液（reagent d） 1毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存清理液（reagent c）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（reagent a）避免光照；有效保证6月
用户自备
体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（tmrm）试剂盒资料
*乙二胺四乙酸混合液（gms12024）：用于细胞脱离
*细胞培养液（gms12052）：用于细胞脱落收集
1.5毫升离心管：用于活体细胞线粒体染色的容器
微型台式离心机：用于细胞收集的操作
培养箱：用于染色孵育
（共聚焦）荧光显微镜：用于活体细胞线粒体荧光定性分析
比色皿或96孔板：用于荧光定量分析的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于活体细胞线粒体荧光定量分析
细胞流式仪：用于活体细胞线粒体荧光分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（reagent a）置入冰槽里融化，稀释液（reagent b）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出10微升染色液（reagent a）到新的1.5毫升离心管，加入890微升稀释液（reagent b），混匀后，在冰槽里静置，并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。
一、直接法
准备1个24孔细胞培养板的待测细胞，每孔铺满率达70％（约105细胞数）小心抽去细胞培养液轻轻沿着孔壁加入1毫升清理液（reagent c）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面（选择步骤）加入50微升强化液（reagent d），轻轻混匀（选择步骤）冰上孵育5分钟小心抽去1毫升清理液（reagent c） 加入450微升含有染色液（reagent a） 和稀释液（reagent b）的染色工作液，覆盖培养孔表面放进37℃细胞培养箱里，孵育20分钟（注意避光）小心抽去450微升染色工作液小心加入500微升清理液（reagent c）（注意：检测前置于冰槽里）即刻在倒置荧光显微镜下进行观察（滤波器激发波长540nm，散发波长580nm）――可见亮橘红色荧光；如果强度显著减弱，表明线粒体膜电位受到破坏
二、间接法
准备1个12孔细胞培养板的待测细胞，每孔铺满率达70％（约30万细胞数）小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集悬浮细胞）加入1毫升清理液（reagent c）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面小心移出1毫升清理液（reagent c）到15毫升锥形离心管（收集洗脱细胞）加入500微升用户自备的*乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养孔表面置入37℃培养箱1分种轻轻抖动培养板，使细胞脱落，然后加入1毫升*细胞培养液移入15毫升锥形离心管放进 台式离心机离心5分钟，速度为300g小心抽去上清液加入50微升清理液（reagent c）用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群转入到1.5毫升离心管或细胞流式仪测试管加入450微升含有染色液（reagent a） 和稀释液（reagent b）的染色工作液轻度涡旋震荡2秒放进37℃细胞培养箱里，孵育20分钟（注意避光）放进 台式微型离心机离心5分钟，速度为300g小心抽去上清液加入500微升清理液（reagent c）（注意：检测前置于冰槽里）
选择一、（共聚焦）荧光显微镜观察
混匀后，移出50微升在载玻片上即刻进行载玻片压片，在荧光显微镜下进行观察（滤波器激发波长540nm，散发波长580nm） ――可见亮橘红色荧光；如果强度显著减弱，表明线粒体膜电位受到破坏
选择二、细胞流式仪分析
混匀后，即刻进行细胞流式仪分析：观察50000个细胞以上
激发波长
488nm
匹配荧光染料
藻红蛋白（phycoerythrin；pe）
荧光颜色
红色
散发波长
575
流式仪通道
fl2
荧光增强
膜电位正常
选择三、荧光分光光度仪或荧光酶标仪测定
混匀后，移出100微升到黑色96孔板里或100微升比色皿里即刻进行荧光分光光度仪或荧光酶标仪测定（激发波长540nm，散发波长580nm），获得相对荧光单位（rfu）：rfu值高表明线粒体膜电位正常
注意事项
本产品为20次（0.5毫升工作液）操作操作时，须戴手套待测细胞建议不要过于饥饿或过度生长建议细胞染色完成后，即刻进行荧光检测分析孵育时，避免光照健康细胞和线粒体呈现橘红色；死亡或凋亡细胞及损伤线粒体呈现黯淡或无荧光本公司提供fccp溶液，作为线粒体膜电位破坏分子，观察荧光显著减弱现象参考图像荧光显微镜：左侧为正常样品；右侧为处理样品
2）细胞流式仪：上图为正常样品；下图为fccp处理样品
本公司提供系列线粒体试剂产品
非标刀具厂家怎样选择比较好
双鸭山建筑工地冬施燃油暖风机除冰，养殖育雏室柴油暖风机大庆鸡西
美国梅思安Altair 4X电力下水管道气体检测仪
沃中阀门为您介绍刀型闸阀
聚氨酯保温板产品介绍
体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）试剂盒资料
指针式旋转粘度计有哪些特点？
橡塑保温管具有非常不错的使用效果
NIBSC 09/264纤维蛋白原血标准品WHO国际
河卵石液压开箱制砂机一套机械顶多台机械用
物流仓库地坪用固化剂多少钱一方
出口型橡塑海绵管保温和吸音性能
防爆配电箱隔爆面表面处理小技巧分享
实验室家具为什么不可以用一般家具代替？
箱式电阻炉安全技术操作和实验步骤
机床动力头零件热处理的几大工艺
浅析“焊工工艺与技能训练”的模块式教学
气调包装机使用、保养注意事项
中温石墨消解仪介绍
Noviocell —— 三维细胞培养解决方案
主要用途活体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（tmrm）测定试剂是一种旨在通过四甲基罗丹明甲酯染料，选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色，其荧光的增强或减弱说明线粒体膜电位的变化，即内膜电负性的增高或降低，来分析线粒体内膜功能的完整性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体制备物的功能检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老等的研究。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简易，性能稳定。
技术背景
体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（tmrm）试剂盒资料
四甲基罗丹明甲酯（tetramethylrhodamine methyl ester；tmrm），为罗丹明衍生物阳离子染料，作为电势测定（potentiometric）荧光探针：*，具有亲脂性，且细胞低毒和光稳定； 第二，与线粒体内膜负电极结合而聚集；第三，容易进入细胞及其线粒体。四甲基罗丹明甲酯进入细胞后，被细胞内酯酶切离，产生四甲基罗丹明。四甲基罗丹明进入线粒体后，被线粒体俘获，分布和结合在线粒体内膜上，呈现强烈荧光。线粒体膜电位的高低变化决定了tmrm的分布浓度。电位高，tmrm在线粒体的浓度高，显示为强力红色或桔红色；反之，tmrm弥散在胞浆内，荧光减弱表明线粒体膜电位受到损害。
产品内容
染色液（reagent a） 100微升
稀释液（reagent b） 10毫升
清理液（reagent c） 50毫升
强化液（reagent d） 1毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存清理液（reagent c）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（reagent a）避免光照；有效保证6月
用户自备
体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（tmrm）试剂盒资料
*乙二胺四乙酸混合液（gms12024）：用于细胞脱离
*细胞培养液（gms12052）：用于细胞脱落收集
1.5毫升离心管：用于活体细胞线粒体染色的容器
微型台式离心机：用于细胞收集的操作
培养箱：用于染色孵育
（共聚焦）荧光显微镜：用于活体细胞线粒体荧光定性分析
比色皿或96孔板：用于荧光定量分析的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于活体细胞线粒体荧光定量分析
细胞流式仪：用于活体细胞线粒体荧光分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（reagent a）置入冰槽里融化，稀释液（reagent b）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出10微升染色液（reagent a）到新的1.5毫升离心管，加入890微升稀释液（reagent b），混匀后，在冰槽里静置，并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。
一、直接法
准备1个24孔细胞培养板的待测细胞，每孔铺满率达70％（约105细胞数）小心抽去细胞培养液轻轻沿着孔壁加入1毫升清理液（reagent c）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面（选择步骤）加入50微升强化液（reagent d），轻轻混匀（选择步骤）冰上孵育5分钟小心抽去1毫升清理液（reagent c） 加入450微升含有染色液（reagent a） 和稀释液（reagent b）的染色工作液，覆盖培养孔表面放进37℃细胞培养箱里，孵育20分钟（注意避光）小心抽去450微升染色工作液小心加入500微升清理液（reagent c）（注意：检测前置于冰槽里）即刻在倒置荧光显微镜下进行观察（滤波器激发波长540nm，散发波长580nm）――可见亮橘红色荧光；如果强度显著减弱，表明线粒体膜电位受到破坏
二、间接法
准备1个12孔细胞培养板的待测细胞，每孔铺满率达70％（约30万细胞数）小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集悬浮细胞）加入1毫升清理液（reagent c）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面小心移出1毫升清理液（reagent c）到15毫升锥形离心管（收集洗脱细胞）加入500微升用户自备的*乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养孔表面置入37℃培养箱1分种轻轻抖动培养板，使细胞脱落，然后加入1毫升*细胞培养液移入15毫升锥形离心管放进 台式离心机离心5分钟，速度为300g小心抽去上清液加入50微升清理液（reagent c）用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群转入到1.5毫升离心管或细胞流式仪测试管加入450微升含有染色液（reagent a） 和稀释液（reagent b）的染色工作液轻度涡旋震荡2秒放进37℃细胞培养箱里，孵育20分钟（注意避光）放进 台式微型离心机离心5分钟，速度为300g小心抽去上清液加入500微升清理液（reagent c）（注意：检测前置于冰槽里）
选择一、（共聚焦）荧光显微镜观察
混匀后，移出50微升在载玻片上即刻进行载玻片压片，在荧光显微镜下进行观察（滤波器激发波长540nm，散发波长580nm） ――可见亮橘红色荧光；如果强度显著减弱，表明线粒体膜电位受到破坏
选择二、细胞流式仪分析
混匀后，即刻进行细胞流式仪分析：观察50000个细胞以上
激发波长
488nm
匹配荧光染料
藻红蛋白（phycoerythrin；pe）
荧光颜色
红色
散发波长
575
流式仪通道
fl2
荧光增强
膜电位正常
选择三、荧光分光光度仪或荧光酶标仪测定
混匀后，移出100微升到黑色96孔板里或100微升比色皿里即刻进行荧光分光光度仪或荧光酶标仪测定（激发波长540nm，散发波长580nm），获得相对荧光单位（rfu）：rfu值高表明线粒体膜电位正常
注意事项
本产品为20次（0.5毫升工作液）操作操作时，须戴手套待测细胞建议不要过于饥饿或过度生长建议细胞染色完成后，即刻进行荧光检测分析孵育时，避免光照健康细胞和线粒体呈现橘红色；死亡或凋亡细胞及损伤线粒体呈现黯淡或无荧光本公司提供fccp溶液，作为线粒体膜电位破坏分子，观察荧光显著减弱现象参考图像荧光显微镜：左侧为正常样品；右侧为处理样品
2）细胞流式仪：上图为正常样品；下图为fccp处理样品
本公司提供系列线粒体试剂产品
非标刀具厂家怎样选择比较好
双鸭山建筑工地冬施燃油暖风机除冰，养殖育雏室柴油暖风机大庆鸡西
美国梅思安Altair 4X电力下水管道气体检测仪
沃中阀门为您介绍刀型闸阀
聚氨酯保温板产品介绍
体细胞线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）试剂盒资料
指针式旋转粘度计有哪些特点？
橡塑保温管具有非常不错的使用效果
NIBSC 09/264纤维蛋白原血标准品WHO国际
河卵石液压开箱制砂机一套机械顶多台机械用
物流仓库地坪用固化剂多少钱一方
出口型橡塑海绵管保温和吸音性能
防爆配电箱隔爆面表面处理小技巧分享
实验室家具为什么不可以用一般家具代替？
箱式电阻炉安全技术操作和实验步骤
机床动力头零件热处理的几大工艺
浅析“焊工工艺与技能训练”的模块式教学
气调包装机使用、保养注意事项
中温石墨消解仪介绍
Noviocell —— 三维细胞培养解决方案