新生隐球菌PCR试剂盒荧光定量PCR实验步骤
新生隐球菌pcr试剂盒荧光定量pcr实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的trizol试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。rna全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的trizol试剂的60%。
③rna沉淀 将水相上层转移到一干净无rna酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的rna，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的rna沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④rna清洗 移去上清液，每1mltrizol试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用depch2o配制)，清洗rna沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤rna干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使rna沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解rna沉淀 溶解rna时，先加入无rna酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的rna溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的te溶液将分光光度计调零。然后取少量rna溶液用te稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定rna溶液 浓度和纯度。
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③rna沉淀 将水相上层转移到一干净无rna酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的rna，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的rna沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④rna清洗 移去上清液，每1mltrizol试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用depch2o配制)，清洗rna沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤rna干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使rna沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解rna沉淀 溶解rna时，先加入无rna酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的rna溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的te溶液将分光光度计调零。然后取少量rna溶液用te稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定rna溶液 浓度和纯度。
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