适ph值及检测方法

*为蛋白质水解酶,作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。*工作部位在小肠,此处为碱性环境,ph为8左右这决定了*适ph值为8。*能够催化蛋白质的特定肽键水解,这个催化过程是不需要能量的,不会使酶失去活力,也不会改变形状和使自身水解。不同的蛋白酶可以作用在不同氨基酸相连组成的肽键,因此*并不能作用在所有的肽键。

*配制方法:
1. 称取*:按*液浓度为 0.25 %,用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水(若用双蒸水需要调 ph 到 7.2 左右)或 pbs ( d-hanks )液中。搅拌混匀,置于 4℃ 内过夜。
2. 用注射滤器抽滤消毒:配好的*溶液要在超净台内用注射滤器( 0.22 微米微孔滤膜)抽滤除菌。
3. 分装成小瓶于 -20℃ 保存以备使用可!
*原的激活:
将*原粗品称重(湿重),分次加入10倍体积预冷的蒸馏水水(按滤饼重量计算),使滤饼*溶解(一般情况滤饼中硫酸铵含量约占饼重1/4)。用5mol/l naoh将溶液调至ph8.0,慢慢地搅拌下加入固体无水cacl2使溶液的ca2+终浓度达到0.1mol/l(要减去一部分氯化钙与硫酸铵结合生成硫酸钙的钙离子)。取出2ml溶液用于测定激活前的蛋白含量及酶活性。原溶液中加入5mg结晶*,轻轻搅拌均匀,25℃放置2~4h,或4℃放置12~16h,使*原活化。每隔1h取样测定*活性增长情况,直至酶激活速度变慢或停止增长。一般比活可达到3 500~4 000 baee单位/mg。留取2ml溶液用于测定激活后的蛋白质含量和酶活性。激活酶溶液用2mol/l硫酸调ph至 2.5~3.0,滤纸过滤,滤去硫酸钙沉淀,收集滤液,4℃保存备用。

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