1) 直接法
1.标本固定。
2.pbs洗涤2×3分钟。
3.1% h2o2(或1% h2o2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。
4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。
5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。
6.pbs洗涤3×3分钟。
7.dab+h2o2显色5~10分钟,镜下控制染色结果。dab+h2o2应用前15分钟配制。
8.充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。
2) 间接法
1.标本固定。
2.pbs洗涤2×3分钟。
3.1%h2o2(或1%h2o2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。
4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。
5.滴加第一抗体,37℃1小时或4℃过夜。
6.pbs洗涤3×3分钟。
7.滴加酶标二抗,室温1小时。
8.pbs洗涤3×3分钟。
9.0.04%dab+0.03 %h2o2显色5~10分钟。
10. 充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。
3) pap法(过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法)
1.标定固定后,pbs洗涤。
2.1%h2o2(或1%h2o2 甲醇)阻断内源性过氧化物,室温10~20分钟。
3.pbs洗涤2×3分钟。
4.正常血清(二抗的正常血清)孵育,室温20分钟。
5.滴加一抗,室温1小时或4℃过夜。
6.pbs洗涤3×3分钟。
7.滴加二抗,室温30分钟。
8.pbs洗涤3×3分钟。
9.加pap复合物,室温60分钟。
10. pbs洗涤3×3分钟。
11. 0.04%dab+0.03% h2o2显色5~10分钟。
12. 充分水洗。
13. 苏木精复染,封片观察。
4) 双pap法
1~10同单pap法。
11. 二次加酶标二抗。
12. pbs洗。
13. 二次加pap。
14. pbs洗。
15. 0.04%dab+0.03 %h2o2显色5~10分钟。
16. 苏木精复染核,封片,镜检。
5) abc法(卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法)
1~8同pap法
9)加abc液,室温60分钟。
10) pbs洗。
11) 0.04%dab+0.03% h2o2显色5~10分钟。
12) 充分水洗。
13) 苏木精复染核,封片,镜检。
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