ZR-75-1人乳腺癌细胞培养步骤
zr-75-1人乳腺癌细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备rpmi-1640培养基(rpmi-1640:gibco,货号31800022, 添加nahco3 1.5g/l, d-葡萄糖2.5g/l, 丙酮酸钠 0.11g/l)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%wan全培养基，10%dmso，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4ml培养基混合均匀。在1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
收到后处理
培养至良好状态后灌满wan全培养液并封好瓶口是运输细胞的 办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶,消毒后放到超净台内严格无菌操作,将细胞瓶放入37℃、5%co2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存( 40x,100x,200x各一张),前三天照片是重要售后依据,不提供照片默认收到状态良好。(传代后建议一瓶用原瓶的wan全培养基,另外一瓶用自己配的wan全培养基,以便进行对比培养,换液拧松瓶盖),该细胞的str鉴定可向客服咨询索取。
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2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%wan全培养基，10%dmso，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4ml培养基混合均匀。在1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
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培养至良好状态后灌满wan全培养液并封好瓶口是运输细胞的 办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶,消毒后放到超净台内严格无菌操作,将细胞瓶放入37℃、5%co2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存( 40x,100x,200x各一张),前三天照片是重要售后依据,不提供照片默认收到状态良好。(传代后建议一瓶用原瓶的wan全培养基,另外一瓶用自己配的wan全培养基,以便进行对比培养,换液拧松瓶盖),该细胞的str鉴定可向客服咨询索取。
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