细胞融合实验看这篇就够了
细胞融合(cell fusion)，细胞遗传学名词，是在自发或人工诱导下，两个细胞或原生质体融合形成一个杂za种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂za种细胞。细胞融合可作为一种实验方法被广泛适用于单克隆抗体的制备，膜蛋白的研究。
细胞融合实验所需试剂：
（1）胎牛血清或小牛血清
（2）培养基：细胞融合常用的培养液有dmem、rpmi 1640 及无血清培养基等。dmem有高糖（4500mg／l）及低糖（1000mg／l）之分。杂交瘤细胞在上述几种培养基中均能良好的生长与增殖
（3）hat及ht培养液：hat、ht以五十分之一的比例加入培养基（ dmem或rpmi 1640）
（４）聚乙二醇（peg）溶液：称取一定量的peg，高压蒸汽灭菌（8磅30分钟），待其冷至50℃左右，与等体积的rpmi1640混合，即为50%的peg溶液，封口后4℃放置备用。用于细胞融合的peg的分子量可在1000－6000之间，目前已有商品化的50%peg溶液可直接用于细胞融合。
细胞融合的方法：
动物细胞杂交或细胞融合
将两个不同种的亲本细胞a和b，以灭活的仙台病毒或聚乙二醇(peg)为融合诱导剂，使a和b两细胞融合成为一个具两个遗传性不同核的异核体（如遗传性相同的核融合在一起叫同核体）。
随后异核体经有丝分裂成为两个具有a和b两亲本的za种融合核。ab杂za种经多次分裂，b亲本的染色体会逐渐减少到一个或完wan全消失。
peg促进细胞融合注意事项：
（1）事先做好两种原生质体融合的识别标记，如色素、缺陷型、抗性标记等。
（2）原生质体或细胞密度应在105个/ml，两种原生质体或细胞按1：1等量混合
（3）peg诱导融合的效果，同分子量大小及浓度高低密切相关。分子量和浓度愈大，促进细胞融合的能力愈高，而其粘度及对细胞的毒性也随之增大，故通常以选用分子4000-6000浓度30-50%的peg进行融合为宜。
（4）peg使细胞融合或致死剂量界限很狭小，为达到成功有效的融合，还必须严格掌握peg的处理时间。一般加入peg后，24℃培育10-20min（注意时间宜短不宜长，过长使原生质体周围包裹一层膜形成凝集体，降低融合率），缓缓加入高钙离子溶液15min后用冲洗液清洗，离心收集细胞或原生质体。
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随后异核体经有丝分裂成为两个具有a和b两亲本的za种融合核。ab杂za种经多次分裂，b亲本的染色体会逐渐减少到一个或完wan全消失。
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（2）原生质体或细胞密度应在105个/ml，两种原生质体或细胞按1：1等量混合
（3）peg诱导融合的效果，同分子量大小及浓度高低密切相关。分子量和浓度愈大，促进细胞融合的能力愈高，而其粘度及对细胞的毒性也随之增大，故通常以选用分子4000-6000浓度30-50%的peg进行融合为宜。
（4）peg使细胞融合或致死剂量界限很狭小，为达到成功有效的融合，还必须严格掌握peg的处理时间。一般加入peg后，24℃培育10-20min（注意时间宜短不宜长，过长使原生质体周围包裹一层膜形成凝集体，降低融合率），缓缓加入高钙离子溶液15min后用冲洗液清洗，离心收集细胞或原生质体。
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