1.dna电泳与溴化乙锭
“dna的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验的基础型实验。“质粒dna的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。这些涉及到dna的提纯及鉴定的实验都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭对dna进行染色。eb是强诱变剂,具有高致癌性,会在60~70 cc蒸发,所以在学生实验中要特别注意其安全使用,严禁随便丢弃。在实验中使用及实验结束后处理应注意以下事项。
1.1使用中注意事项
实验室涉及到eb的操作应统一固定在实验室的某一角落,称量固体时要带面罩和手套,使用含有eb的溶液务必带上手套。同时不要在胶太热的时候加eb,以防止因蒸发被吸入。接触到eb的玻璃器皿应集中放置并专门使用,污染到eb的枪头、抹布、手套及eb染色跑完的胶,回收至棕色的玻璃瓶中,定期进行焚烧处理旧。桌面或物体表面污染到eb时,可用活性碳进行处理。
1.2 废eb溶液处理
(1)eb浓溶液(浓度大于0.5 mg/mi)的净化处理
先将eb溶液用水稀释至浓度低于0.5 mg/mi,加人1倍体积的5%次*,小心混匀后再加1倍体积的2.5 mol/l盐酸。小心混匀,于室温放置数小时;加入l倍体积的2.5 mol/l氢氧化钠,小心混匀后可丢弃该溶液,统一处理。
(2)eb稀溶液(浓度小于0.5 mg/mi)的净化处理按1 mg/ml的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1 h;用滤纸过滤溶液,丢弃滤液并将活性碳与滤纸密封后丢弃,统一处理。
2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳与有毒、有害物质
聚丙烯酰胺凝胶电泳在生物化学实验中是常用的实验手段,涉及到蛋白质分离纯化及鉴定、蛋白质分子量及等电点测定的实验都会使用到该电泳方法,如“聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质”、“sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子量”、“聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦法测定蛋白质等电点”等基础实验。在聚丙烯酰胺凝胶制备过程中用到以下有毒、有害物质:
2.1 丙烯酰胺
丙烯酰胺具有很强的神经毒性,同时还有生殖、发育毒性。神经毒性作用表现为周围神经退行性变化和脑中涉及学习、记忆和其他认知功能部位的退行性变化。实验还显示丙烯酰胺是一种可能致癌物。丙烯酰胺可通过皮肤吸收及呼吸道进入人体,且累积毒性,不容易排毒。因此,称量固体丙烯酰胺粉末和处理它们的溶液时必须戴手套和口罩。当丙烯酰胺聚合为聚丙烯酰胺凝胶时则为无毒的,但操作时仍要小心,凝胶内可能有少量未聚合的丙烯酰胺。
2.2 甲叉双丙烯酰胺
甲叉双丙烯酰胺是丙烯酰胺形成凝胶的交联剂,因有取代基丙烯酰胺,因此具有一定的毒性,能轻微刺激眼睛、皮肤和粘膜。称量固体粉末和处理它们的溶液时需戴手套和口罩,应避免与人体长时间直接接触,误碰触时应用清水洗净。
2.3 temed
temed是形成凝胶反应所用的加速剂,也具有强神经毒性,应防止误吸,操作时快速,存放时密封。
2.4 过硫酸铵
过硫酸铵是丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺进行化学聚合的引发剂,对黏膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有*危害性。吸人可致命。操作时需戴合适的手套、安全眼镜和面罩,始终在通风橱里操作,操作完后*洗手。
2.5 十二烷基硫酸钠(sds)
sds是·种阴离子表面活性剂,与蛋白形成复合物,用于测定蛋白质分子量。sds有毒,是一种刺激物,能对眼睛造成严重损伤,可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。称量及配溶液时不要吸人其粉末,需戴合适的手套、面罩和护目镜。
2.6 巯基乙醇
它在测定蛋白质分子量时用于处理样品,吸入、摄人或经皮肤吸收后会中毒。其中毒表现有紫绀、呕吐、震颤、头痛、惊厥、昏迷,甚至死亡;对眼、皮肤有强烈刺激性;对环境有危害;对水体可造成污染。应在通风橱里操作,佩戴面罩,戴乳胶手套。
3. rna提取与有毒、有害溶剂
“动物肝脏rna的制备和纯度测定”是生物化学实验课中必开的基础实验,rna的提取过程需要用到溶剂去除蛋白质,这些溶剂对人体具有一定的毒性。
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