RTS BL21(DE3)表达感受态细胞使用方法
rts bl21(de3)表达感受态细胞使用方法
rts（room temperature stable）系列感受态细胞，其室温可保存3天、-20°c可保存2年（推荐保存温度）、-80°c可长期保存性能无下降。运输过程中无需干冰，可常规冰袋运输（推荐运输温度）。rts表达感受态细胞均为热激感受态细胞，转用于蛋白表达（不可用于克隆和载体构建），经42°c热激1min可获得105～106cfu/μg效价，可满足质粒转化要求。该制品使用简单、运输、储存方便。
使用方法
1. 从-20°c冰箱中取出nano e.coli transfection reagent融化，放置于冰上。
注意：该试剂含长链带电化合物，允许反复冻融20次，使用完毕后继续-20°c保存。
2. 取50 μl nano e.coli transfection reagent置于0.2 ml ep管中，加入10～100 ng质粒dna（不可使用连接产物），枪头吹打混合均匀，冰上放置2min。
注意：放置时间不要超过30min，过长时间会导致核酸聚合，从而影响转化效价。
3. 将上述混合物（50 μl nano e.coli transfection reagent和质粒dna）加入到一支rts表达感受态细胞干粉中，枪头轻轻吹打，溶解细胞干粉，置于冰上15min。
注意：使用rts 表达感受态细胞干粉，轻甩干粉至管底部，如果发现干粉已经溶解则不可使用。
4. 置于42°c热激1min后，迅速置于冰上急冷2min。
5. 将热激完毕的感受态细胞转移到含有450 μl不含抗生素的soc（或lb）培养基，37°c振荡（225 rpm）培养60min。使质粒上抗性标记基因表达，菌体复苏。
6. 取200 μl复苏菌液涂布到含相应抗生素的lb琼脂平板表面。
7. 将平板置于37°c培养，12~18小时后可出现菌落。
8. 获得的表达菌，可使用iptg进行诱导表达，从而获得重组蛋白。
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2. 取50 μl nano e.coli transfection reagent置于0.2 ml ep管中，加入10～100 ng质粒dna（不可使用连接产物），枪头吹打混合均匀，冰上放置2min。
注意：放置时间不要超过30min，过长时间会导致核酸聚合，从而影响转化效价。
3. 将上述混合物（50 μl nano e.coli transfection reagent和质粒dna）加入到一支rts表达感受态细胞干粉中，枪头轻轻吹打，溶解细胞干粉，置于冰上15min。
注意：使用rts 表达感受态细胞干粉，轻甩干粉至管底部，如果发现干粉已经溶解则不可使用。
4. 置于42°c热激1min后，迅速置于冰上急冷2min。
5. 将热激完毕的感受态细胞转移到含有450 μl不含抗生素的soc（或lb）培养基，37°c振荡（225 rpm）培养60min。使质粒上抗性标记基因表达，菌体复苏。
6. 取200 μl复苏菌液涂布到含相应抗生素的lb琼脂平板表面。
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