人钩端螺旋体抗体（Lep-Ab）检测试剂盒说明书
人钩端螺旋体抗体(lep-ab)检测试剂盒说明书
本试剂盒仅供研究使用。
96t
使 用 目 的 ：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中钩端螺旋体抗体(lep-ab)表达。
实 验 原 理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人钩端螺旋体抗体(lep-ab)表达。 用纯化的人甲肝病
毒抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中钩端螺旋体抗体(lep-ab)相结合，经洗涤除
去未结合的抗原和其他成分后再与 hrp 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，
经过*洗涤后加底物 tmb 显色。tmb 在 hrp 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下
转化成zui终的黄色。 用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度 （od 值） ， 与 cutoff 值相比较，
从而判定标本中人钩端螺旋体抗体(lep-ab)的存在与否。
试 剂 盒 组 成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 阳性对照 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 阴性对照 0.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂 a 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂 b 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标 本 要 求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 nan3 的样品，因 nan3 抑制辣根过氧化物酶的（hrp）活性。
操 作 步 骤
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1
孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先
加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不
触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 a50μl，再加入显色剂 b50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（od 值） 。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
操 作 程 序 总 结 ：
计 算 和 结 果 判 定 ：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10
临界值（cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品 od 值< 临界值（cut off）者为钩端螺旋体抗体(lep-ab)阴性
阳性判定：样品 od 值≥ 临界值（cut off）者为钩端螺旋体抗体(lep-ab)阳性
。
注 意 事 项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2m 的硫酸，使用时必须
注意安全。
保 存 条 件 及 有 效 期
1．试剂盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6 个月
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使 用 目 的 ：
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实 验 原 理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人钩端螺旋体抗体(lep-ab)表达。 用纯化的人甲肝病
毒抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中钩端螺旋体抗体(lep-ab)相结合，经洗涤除
去未结合的抗原和其他成分后再与 hrp 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，
经过*洗涤后加底物 tmb 显色。tmb 在 hrp 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下
转化成zui终的黄色。 用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度 （od 值） ， 与 cutoff 值相比较，
从而判定标本中人钩端螺旋体抗体(lep-ab)的存在与否。
试 剂 盒 组 成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 阳性对照 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 阴性对照 0.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂 a 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂 b 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标 本 要 求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 nan3 的样品，因 nan3 抑制辣根过氧化物酶的（hrp）活性。
操 作 步 骤
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1
孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先
加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不
触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
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6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 a50μl，再加入显色剂 b50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（od 值） 。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
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。
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5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2m 的硫酸，使用时必须
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