丙酮酸(Pyruvic Acid PA)含量测定试剂盒 说明 技术文章

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丙酮酸(pyruvic acid pa)含量测定试剂盒商品货号:qs2204
英文名称:pyruvate (pa)assay kit
别名:丙酮酸试剂盒 pa kit 丙酮酸(pa)试剂盒 丙酮酸(pa)测试盒
检测方法:常量法
商品货号:商品品牌:规格基本售价选择规格
qs2204-50管/48样 50管/48样 ¥300.00元
产品详细介绍

测定意义:
丙酮酸通过乙酰coa连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢,起着重要的枢纽作用。
测定原理:
丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在碱性溶液中呈色。
产品说明书
货号:qs2204 规格:50 管/48 样
丙酮酸(pyruvic acid pa)含量测定试剂盒说明书 可见分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
丙酮酸通过乙酰 coa 连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢,起着重要的枢纽作用。
测定原理:
丙酮酸与 2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在碱性溶液中呈色。
自备实验用品及仪器:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 50ml×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 5ml×1 瓶, 4℃避光保存;
试剂二:液体 25ml×1 瓶, 4℃保存。
丙酮酸提取:
1、细菌或培养细胞:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(ml)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液),超 声波破碎(冰浴,功率 20%或 200w,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),静置 30min, 8000g, 25℃离心 10min,取上清待测。
2、组织:
按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加 入 1ml 提取液),进行冰浴匀浆,静置 30min,8000g,25℃离心 10min,取上清待测。
3、血清(浆)样品:
按照血清(浆)体积(ml):提取液体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议取 0.1ml 血清(浆)加入 1ml 提取液),进行冰浴匀浆,静置 30min, 8000g,25℃离心 10min, 取上清待测。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 520nm,蒸馏水调零。
2、取 300μ l 样本+100μ l 试剂一于 1.5ml ep 管中,混匀,静置 2min,加入 500μ l 试剂二, 混匀,于 520nm 波长处测定管吸光值 a。
丙酮酸含量计算:
1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0466x + 0.0675; x 为丙酮酸含量(µg/ml),y 为吸光值。
2、按照血清(浆)体积计算
丙酮酸含量(μ g/ml)= [(a-0.0675)÷0.0466×v1]÷(v3×v1÷v2)=214.6×(a-0.0675)
3、按照蛋白浓度计算
丙酮酸含量(μ g/mg prot)=[(a-0.0675)÷0.0466×v1]÷(v1×cpr)=21.46×(a-0.0675) ÷cpr
4、按照样品质量计算
丙酮酸含量(µg/g 鲜重)= [(a-0.0675)÷0.0466×v1]÷(w ×v1÷v2)=21.46×(a-0.0675)÷w
3、按照细菌或细胞密度计算
丙酮酸含量( μ g/104 cell ) = [(a-0.0675)÷0.0466×v1]÷ ( 500×v1÷v2 ) =0.043×(a-0.0675)
v1:加入反应体系中样本体积,0.3ml;v2:加入提取液体积,1 ml;v3:加入血清(浆)体 积,0.1 ml; cpr:样本蛋白质浓度,mg/ml;w:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
注意:低检测限为 1μ g/ml 或 1μ g/g 鲜重或 10ng/mg prot
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