tris和磷酸盐都是很常用的缓冲液,它们有相同的地方也有很多不同的地方,如何能在使用时正确分辨和选择,这也是难倒了一批人。我们今天就先从它们各自的应用及使用环境讲起。让你能很直观的感受到它们的区别。
tris缓冲液
在电泳缓冲液中同*构成缓冲体系稳定ph值;在凝胶中使用tris-hcl缓冲体系稳定ph值;被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂;tris缓冲液的低离子强度特点还可用于线虫的中间纤维的形成;在tris盐酸缓冲液中加入edta制成“te缓冲液”,可用于dna的稳定和存储;将调节ph值的酸溶液换成乙酸,获得“tae缓冲液”,换成硼酸可获得tbe缓冲液。这两种缓冲液常用于核酸电泳实验中。
磷酸盐缓冲液
一般的有活性的生物制剂都要用磷酸盐缓冲溶液来稀释。原因就是它具有盐平衡、可调整适宜ph值的缓冲作用。蒸馏水不具有盐平衡作用,会破坏生物蛋白的结构及生物特性;生理盐水不具有调整ph的作用,对完整的、有活性的物质不能保证其在合适条件下参与生物反应,所以使用pbs是先选。当然,有的生物活性物质需要的条件比较高,就需要在平衡缓冲液中加入更多的成分,维持合适的条件保证生物活性物质保持其最完整的特性。因此pbs主要用于细胞实验,其缓冲范围合适宜在中性(7.0)。
在生物化学实验中要慎重地选择缓冲溶液,不仅要考虑缓冲液的缓冲范围,还要综合考虑缓冲液的使用环境:
1. 磷酸盐缓冲溶液的缓冲范围比较宽,但是它在ph7.5以上时缓冲能力很小;tris本身呈碱性,可以只用tris-hcl缓冲体系即可配制ph范围由酸性到碱性的缓冲液,方法也较为简单,对于不同的实验,tris还可以与其他物质组成多种缓冲体系。
2. 磷酸盐缓冲溶液易与常见的ca2+离子、mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀,同时会抑制某些生物化学过程以及多数酶的活性,包括激酶,磷酸化酶,脱氢酶等;相比之下tris缓冲溶液对生物化学过程干扰很小,也不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。若反应体系中存在金属离子或者酶制剂,则以tris缓冲溶液为较优选择。
3. tris缓冲液的ph值受溶液浓度影响较磷酸盐缓冲溶液大,同样稀释十倍,磷酸盐缓冲溶液的ph值变化小于0.1,而tris缓冲液的ph值变化则大于0.1。因此对于体积变化较大的反应体系,则应慎重使用tris 缓冲液。
4. 另外,tris缓冲溶液受环境影响较大。一般来说,温度每升高一度,ph值下降0.03; 同时其易吸收空气中的co2,所以配制的缓冲液要盖严密封。
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