给您一双鉴别支原体污染的慧眼
很多小伙伴都疑惑，细胞被支原体污染后的特征是什么？如何鉴别细胞被支原体污染了？今天，我带大家分享两个支原体污染的案例，共同探寻一下细胞被支原体污染后的特征。
图1 感染支原体的ebtr（牛胚气管细胞）
先来观察一下被支原体污染的牛胚气管细胞（图1），由成纤维样逐渐变得类上皮样；质膜铺展，溃烂；轮廓不清，边界模糊。再看右图，细胞处于边增殖边凋亡的状态，漂浮凋亡细胞过多。
图2 感染支原体的ht1080（人纤维肉瘤细胞）
接下来再观察一下被支原体污染的人纤维肉瘤细胞ht1080（图2），由上皮样逐渐变得类成纤维样，胞体细长，和前面的牛胚气管细胞形态变化刚好相反；伪足伸长，出现明显的拉丝现象，表明细胞可能在“痛苦”地迁移。使用了支原体杀除试剂（abs9375），清除了支原体以后，如右图所示，细胞逐渐恢复了上皮样形态，拉丝减少。
图3 细胞膜上的支原体集落
接下来，给大家展示贴附在细胞膜上的支原体集落（图3），支原体是目前已知最小的原核生物，直径大小在0.1-0.3um，比细菌还要小。支原体可在培养液、细胞膜、细胞内增殖。单个支原体需要借助于电镜才可以观察到具体形态，图中膜上的黑点为支原体集落。细胞背景干净，形态没有大的变化，但质膜粗糙，布满黑点。
总结下来，细胞被支原体污染的主要特征如下：
✔ 增殖减慢；
✔ 上清液澄澈；
✔ 背景干净；
✔ 细胞形态异常（拉丝、铺展）；
✔ 更换新的培养液细胞状态没有恢复。
细胞被支原体污染后的共性表现为细胞增殖减慢、上清液澄澈、背景干净，这3点可以明确地排除真、细菌污染。值得一提的是，当给细胞的营养体系不佳时，细胞也会表现出形态异常，所以，我们可以给细胞更换新的培养液，如果细胞也没有恢复正常形态，此时判断细胞极有可能被支原体“附身”了。
上述的判断方法需要丰富的经验积累，日常细胞培养中，我们还可以用pcr扩增试剂盒检测细胞是否有支原体污染。
图4 支原体检测试剂盒（pcr法） 产品优势：
✔ 本试剂盒检测灵敏度高，可检测低至20个拷贝的支原体；
✔ 实验时间短，3小时即可完成；
✔ 已在多个支原体品种上做过验证。
表1 产品组分表
组分 名称 规格
a mycoplasma pcr mix（2x） 1ml
b mycoplasma primer mix 100ul
c positive control 50ul
d mycoplasma free water 1ml
该试剂盒检测到的支原体类别主要有：
m.fermentans（发酵支原体）、m.hyorhinis（猪鼻支原体）、m.arginini（精氨酸支原体）、m. orale（口腔支原体）、m.hominis（人型支原体）、m.bovis（牛支原体）、m.pneumoniae（肺炎支原体）、m.pirum（梨支原体）、m.gallisepticum（鸡毒支原体）、ureaplasma spp（解脲支原体）、a.laidlawii（莱氏无胆甾原体）等11种以上支原体。
作用原理：
试剂盒使用的混合引物是针对支原体16s rrna序列的保守区域设计的特异性引物，可直接使用细胞培养液作为pcr模板，特异性扩增支原体dna。
支原体检测试剂盒（pcr法）使用方法
1、样品准备
取适量待检细胞培养上清于洁净的pcr管中（如果是血清样本，可用 mycoplasma free water 稀释），利用pcr仪95℃热处理5min后作为模板；
2、pcr体系配制
每次实验需设置阴性对照（将1μl待检样品换成等量的mycoplasma free water）与阳性对照（在1μl待检样品中加入0.5μl positive control后一起作为template），实验时戴一次性口罩与手套，谨慎操作，防止操作不当引入外源支原体污染；
3、pcr程序设置
表2
step temperature time cycles
initial denaturation 98℃ 2 min 1
denaturation 98℃ 20s
annealing 56℃ 25s 30
extension 72℃ 10s
final extension 72℃ 5min 1
hold 4-16℃ forever
4、凝胶电泳
取10μl pcr产物，使用1%琼脂糖凝胶进行电泳检测；
5、结果分析
每次实验通过与阴性对照、阳性对照检测结果比较确认样品支原体污染情况，阳性条带大小500bp左右。如阴性对照检测结果中有条带很有可能是pcr体系中出现污染，建议重新实验确认结果。如有必要，也可对pcr产物进行常规测序，以确定具体的支原体种属。
如果您的细胞真的“中镖”了，也不要怕，我们的支原体杀除试剂为您的细胞披荆斩棘，保驾护航。
图5 支原体清除剂（abs9375-200ul×5）
产品优势：
✔ 特异性清除培养基中的支原体；
✔ 只需要3-6天，便可以有效清除支原体；
✔ 活性成分为多肽类，不会产生耐药性；
✔ 对细胞几乎无毒性，在100多种细胞上进行过验证，包括但不限于 hek293、hela、mcf-7、mrc-5、nih-3t3、ccc-esf、cho-s、cho-k1、cho-dg44、h295r、hl-60、k562、mda-mb-231、sp2/0、t47d、bm和bv2等；
✔ 广谱性，可替代双抗，可以清除常见的革兰氏阴性和阳性菌；
✔ 可直接加入血清、培养基中，用于清除支原体污染；
使用方法：
1、收到货后，将试剂管瞬时离心（3000rpm，3～5s）保存。
2、推荐稀释比例为1:1000。例如10ml的培养基加入10μl的treatment混匀。
3、弃去旧的培养基，用pbs将细胞清洗干净，再加入含有支原体清除剂的新鲜培养基，1天1次， 连续处理3天；或者2天1次，连续处理5～6天。若细胞污染非常严重时，需延长处理时间。
4、若细胞对支原体清除剂敏感，或生长明显被抑制时，请参考以下推荐参数。
表3
大部分细胞 部分敏感细胞 少部分极敏感细胞
稀释比例 1：1000 1：2000 1：3000
处理时间 3天 6天 10天
5、处理完毕后，加入新鲜培养基，培养基中可添加支原体预防剂（abs9376）预防支原体再次污染。
本期讲解就到这里了，如有细胞培养问题，欢迎微信公众号后台留言，或者扫描下方二维码加入我们微信群交流~
注：图源网络和客户，仅供参考学习用
表4 细胞培养类产品推荐
货号
品名
规格
abs981
胎牛血清（特级）
500ml
abs972
胎牛血清（优级）
500ml
abs974
胎牛血清（标准级）
500ml
abs9483
高糖dmem培养基
500ml
abs9484
rpmi-1640培养基
500ml
abs9505
mem培养基
500ml
abs9506
α-mem培养基
500ml
abs9554
ham's f-12培养基
500ml
abs9563
ham's f-12k培养基
500ml
abs9561
dmem/f-12培养基
500ml
abs962
pbs缓冲液
500ml
abs970
d-pbs缓冲液（不含 ca2+mg2+）
500ml
abs971
d-pbs缓冲液（含 ca2+mg2+)
500ml
abs9257
hanks平衡盐溶液（不含 ca2+mg2+)
500ml
abs9258
hanks平衡盐溶液（含 ca2+mg2+)
500ml
abs47014938
胰蛋白酶-edta消化液（0.25%） ，含酚红
100ml
abs47047375
胰蛋白酶-edta消化液（0.25%），不含酚红
100ml
abs9479
无dmso无血清细胞冻存液
100ml
abs9417
无血清细胞冻存液
100ml
abs9473
细胞冻存液（含血清）
100ml
abs9474
组织保存液
100ml
abs9480
组织冻存试剂盒
30ml
abs9486
模具
1个/套
abs9487
小刀
5片/包
abs9481
组织复苏试剂盒
50ml
abs42020125
卡那霉素b硫酸盐
250mg
abs42018967
硫酸庆大霉素溶液
10ml
abs9244
青链双抗
100ml
abs9245
青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液
100ml
abs42013298
两性霉素b
1g
abs44071148
制霉菌素
1g
abs9246
青霉素-链霉素-两性霉素b混合溶液
100ml
abs9252
支原体检测试剂盒
100t
abs9375
支原体清除试剂
200ul×5
abs9376
支原体预防
500ul×4
abs816578
环丙沙星盐酸盐
500mg
abs9374
水盘抑菌剂
20ml
abs9371
水浴锅抑菌剂
100ml
abs9372
培养箱除菌剂
480ml
abs9373
细胞房除菌剂
480ml
absin特色产品线：
wb相关：ecl发光液、预染marker、预制胶；ihc相关：二抗试剂盒、组化笔；ip/coip试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、bsa、蛋白酶k、ctb、ttx、cee；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；elisa试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...
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图2 感染支原体的ht1080（人纤维肉瘤细胞）
接下来再观察一下被支原体污染的人纤维肉瘤细胞ht1080（图2），由上皮样逐渐变得类成纤维样，胞体细长，和前面的牛胚气管细胞形态变化刚好相反；伪足伸长，出现明显的拉丝现象，表明细胞可能在“痛苦”地迁移。使用了支原体杀除试剂（abs9375），清除了支原体以后，如右图所示，细胞逐渐恢复了上皮样形态，拉丝减少。
图3 细胞膜上的支原体集落
接下来，给大家展示贴附在细胞膜上的支原体集落（图3），支原体是目前已知最小的原核生物，直径大小在0.1-0.3um，比细菌还要小。支原体可在培养液、细胞膜、细胞内增殖。单个支原体需要借助于电镜才可以观察到具体形态，图中膜上的黑点为支原体集落。细胞背景干净，形态没有大的变化，但质膜粗糙，布满黑点。
总结下来，细胞被支原体污染的主要特征如下：
✔ 增殖减慢；
✔ 上清液澄澈；
✔ 背景干净；
✔ 细胞形态异常（拉丝、铺展）；
✔ 更换新的培养液细胞状态没有恢复。
细胞被支原体污染后的共性表现为细胞增殖减慢、上清液澄澈、背景干净，这3点可以明确地排除真、细菌污染。值得一提的是，当给细胞的营养体系不佳时，细胞也会表现出形态异常，所以，我们可以给细胞更换新的培养液，如果细胞也没有恢复正常形态，此时判断细胞极有可能被支原体“附身”了。
上述的判断方法需要丰富的经验积累，日常细胞培养中，我们还可以用pcr扩增试剂盒检测细胞是否有支原体污染。
图4 支原体检测试剂盒（pcr法） 产品优势：
✔ 本试剂盒检测灵敏度高，可检测低至20个拷贝的支原体；
✔ 实验时间短，3小时即可完成；
✔ 已在多个支原体品种上做过验证。
表1 产品组分表
组分 名称 规格
a mycoplasma pcr mix（2x） 1ml
b mycoplasma primer mix 100ul
c positive control 50ul
d mycoplasma free water 1ml
该试剂盒检测到的支原体类别主要有：
m.fermentans（发酵支原体）、m.hyorhinis（猪鼻支原体）、m.arginini（精氨酸支原体）、m. orale（口腔支原体）、m.hominis（人型支原体）、m.bovis（牛支原体）、m.pneumoniae（肺炎支原体）、m.pirum（梨支原体）、m.gallisepticum（鸡毒支原体）、ureaplasma spp（解脲支原体）、a.laidlawii（莱氏无胆甾原体）等11种以上支原体。
作用原理：
试剂盒使用的混合引物是针对支原体16s rrna序列的保守区域设计的特异性引物，可直接使用细胞培养液作为pcr模板，特异性扩增支原体dna。
支原体检测试剂盒（pcr法）使用方法
1、样品准备
取适量待检细胞培养上清于洁净的pcr管中（如果是血清样本，可用 mycoplasma free water 稀释），利用pcr仪95℃热处理5min后作为模板；
2、pcr体系配制
每次实验需设置阴性对照（将1μl待检样品换成等量的mycoplasma free water）与阳性对照（在1μl待检样品中加入0.5μl positive control后一起作为template），实验时戴一次性口罩与手套，谨慎操作，防止操作不当引入外源支原体污染；
3、pcr程序设置
表2
step temperature time cycles
initial denaturation 98℃ 2 min 1
denaturation 98℃ 20s
annealing 56℃ 25s 30
extension 72℃ 10s
final extension 72℃ 5min 1
hold 4-16℃ forever
4、凝胶电泳
取10μl pcr产物，使用1%琼脂糖凝胶进行电泳检测；
5、结果分析
每次实验通过与阴性对照、阳性对照检测结果比较确认样品支原体污染情况，阳性条带大小500bp左右。如阴性对照检测结果中有条带很有可能是pcr体系中出现污染，建议重新实验确认结果。如有必要，也可对pcr产物进行常规测序，以确定具体的支原体种属。
如果您的细胞真的“中镖”了，也不要怕，我们的支原体杀除试剂为您的细胞披荆斩棘，保驾护航。
图5 支原体清除剂（abs9375-200ul×5）
产品优势：
✔ 特异性清除培养基中的支原体；
✔ 只需要3-6天，便可以有效清除支原体；
✔ 活性成分为多肽类，不会产生耐药性；
✔ 对细胞几乎无毒性，在100多种细胞上进行过验证，包括但不限于 hek293、hela、mcf-7、mrc-5、nih-3t3、ccc-esf、cho-s、cho-k1、cho-dg44、h295r、hl-60、k562、mda-mb-231、sp2/0、t47d、bm和bv2等；
✔ 广谱性，可替代双抗，可以清除常见的革兰氏阴性和阳性菌；
✔ 可直接加入血清、培养基中，用于清除支原体污染；
使用方法：
1、收到货后，将试剂管瞬时离心（3000rpm，3～5s）保存。
2、推荐稀释比例为1:1000。例如10ml的培养基加入10μl的treatment混匀。
3、弃去旧的培养基，用pbs将细胞清洗干净，再加入含有支原体清除剂的新鲜培养基，1天1次， 连续处理3天；或者2天1次，连续处理5～6天。若细胞污染非常严重时，需延长处理时间。
4、若细胞对支原体清除剂敏感，或生长明显被抑制时，请参考以下推荐参数。
表3
大部分细胞 部分敏感细胞 少部分极敏感细胞
稀释比例 1：1000 1：2000 1：3000
处理时间 3天 6天 10天
5、处理完毕后，加入新鲜培养基，培养基中可添加支原体预防剂（abs9376）预防支原体再次污染。
本期讲解就到这里了，如有细胞培养问题，欢迎微信公众号后台留言，或者扫描下方二维码加入我们微信群交流~
注：图源网络和客户，仅供参考学习用
表4 细胞培养类产品推荐
货号
品名
规格
abs981
胎牛血清（特级）
500ml
abs972
胎牛血清（优级）
500ml
abs974
胎牛血清（标准级）
500ml
abs9483
高糖dmem培养基
500ml
abs9484
rpmi-1640培养基
500ml
abs9505
mem培养基
500ml
abs9506
α-mem培养基
500ml
abs9554
ham's f-12培养基
500ml
abs9563
ham's f-12k培养基
500ml
abs9561
dmem/f-12培养基
500ml
abs962
pbs缓冲液
500ml
abs970
d-pbs缓冲液（不含 ca2+mg2+）
500ml
abs971
d-pbs缓冲液（含 ca2+mg2+)
500ml
abs9257
hanks平衡盐溶液（不含 ca2+mg2+)
500ml
abs9258
hanks平衡盐溶液（含 ca2+mg2+)
500ml
abs47014938
胰蛋白酶-edta消化液（0.25%） ，含酚红
100ml
abs47047375
胰蛋白酶-edta消化液（0.25%），不含酚红
100ml
abs9479
无dmso无血清细胞冻存液
100ml
abs9417
无血清细胞冻存液
100ml
abs9473
细胞冻存液（含血清）
100ml
abs9474
组织保存液
100ml
abs9480
组织冻存试剂盒
30ml
abs9486
模具
1个/套
abs9487
小刀
5片/包
abs9481
组织复苏试剂盒
50ml
abs42020125
卡那霉素b硫酸盐
250mg
abs42018967
硫酸庆大霉素溶液
10ml
abs9244
青链双抗
100ml
abs9245
青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液
100ml
abs42013298
两性霉素b
1g
abs44071148
制霉菌素
1g
abs9246
青霉素-链霉素-两性霉素b混合溶液
100ml
abs9252
支原体检测试剂盒
100t
abs9375
支原体清除试剂
200ul×5
abs9376
支原体预防
500ul×4
abs816578
环丙沙星盐酸盐
500mg
abs9374
水盘抑菌剂
20ml
abs9371
水浴锅抑菌剂
100ml
abs9372
培养箱除菌剂
480ml
abs9373
细胞房除菌剂
480ml
absin特色产品线：
wb相关：ecl发光液、预染marker、预制胶；ihc相关：二抗试剂盒、组化笔；ip/coip试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、bsa、蛋白酶k、ctb、ttx、cee；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；elisa试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...
澳门特区政府携手阿里 共促智慧城市发展
立式加工中心正常运转需具备的4个条件
解析不同情况仪器仪表误差的产生、计算、标定的方法
全自动插拔力试验机视频
HRY5-护套式电加热器应用及技术指标
给您一双鉴别支原体污染的慧眼
LDCK-80电磁流量计安装注意事项
苏州批发固体臭味剂
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拉力试验机位移出现异常如何解决
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粉碎机安装后怎么来维护呢
如何正确使用针焰试验仪
安装智能三辊闸其实简单，看完就学会了
脉冲布袋除尘器漏风现象如何解决？
混凝土收缩膨胀仪操作与使用
浅谈日本SMC气体过滤器选型原则与结构