尼康显微镜荧光激发块的组合及命名

落射荧光干涉和吸收滤光片组合位于一个激发块(或光学模块)中,包括激发滤光片,双色分束器(通常称为反射镜)和屏障(或激发)滤光片,如图1(a)所示。使用本指南选择合适的滤光片组,以匹配在宽视野荧光显微镜研究中使用的生色团的光谱激发和激发特性。典型的高性能带通激发蓝色激发滤光片组合的光谱图作为示例在图1(b)中给出。尼康荧光滤光片组合分别提供窄,中和宽通带激发块,并具有带通或长通频谱特性的相应激发滤波器。
图1-荧光滤光片组合光谱图
紫外线激发 -尼康紫外线激发荧光滤光片产品组合中包含四种精心平衡的组合,这些组合包含带通或长通激发(屏障)滤光片,能够选择性地隔离可见,深蓝色,绿色和红色的狭窄或宽阔区域的荧光波长。这些滤光片组合覆盖了330至380纳米的激发波长范围,通带宽度分布为10、40和50纳米。三种组合使用相同的双色镜,而第四组具有较低波长截止的镜面,以与其更窄的激发带一致。紫外线滤光片组包含长通或单带通滤光片。
紫罗兰色激发 -尼康紫罗兰色激发荧光滤光片系列包括三种组合,分别包含带通滤光片或长通激发滤光片(屏障),这些滤光片能够选择性地隔离蓝,绿和红色波长的狭窄或较宽区域的荧光激发。这些组合覆盖了379-420纳米之间的激发波长范围,带通宽度分布分别为10、22和40纳米。两种组合使用相同的双色镜,而第三组使用的截止波长较低的镜与其较短波长的激发带一致。
蓝紫色激发 -尼康蓝紫色激发荧光滤光片产品组合中包含四种组合,包括带通或长通激发(阻挡)滤光片,能够选择性地隔离通过青色,绿色和绿色的狭窄或宽阔区域的荧光激发红色波长。这些互补滤光片组的激发波长范围在400-446纳米之间,带通宽度分布为10、20和40纳米。三种组合使用相同的双色镜,而第四组具有更高的截止波长(5纳米)以与其其他组件一致的镜。
蓝色激发 - 尼康蓝光激发荧光滤光片补充剂由六个平衡组合组成,包含带通或长通激发(屏障)滤光片,能够通过绿色,黄色,红色和近红外的窄带或宽带选择性地隔离荧光激发光谱区域。这些滤光片组的激发波长范围在420至495纳米之间,带通宽度分布为20、30、40和70纳米。五个组合使用相同的双色镜,而第六个组合使用了较低波长截止的镜以增加获取的信号。用于尼康蓝色激发滤光片组合的带通屏障滤光片的光谱宽度均为40纳米。激发块之一(b-3a)设计用于卤素钨灯照明。
绿色激发 - 尼康绿色激发荧光滤光片组合系列包括六个模块,这些滤光片结合了单带通或长通激发(阻挡)滤光片,能够选择性地隔离黄色,橙色,红色和近红外光谱区域的窄带或宽频带内的荧光。这些滤光片组合的激发波长范围在510到560纳米之间,通带宽度分布为10、25、30和50纳米(包括窄,中和宽激发带)。三种组合使用相同的双色镜(565纳米),而其他三种具有更高的波长截止值(570或575纳米)的镜。六个尼康绿色激发滤光片组中的两个包含带宽为60和75纳米的带通势垒滤光片。
黄色激发 - 尼康公司的黄色激发荧光滤光片组合包括两个平衡组,这些滤光片结合了单个带通(屏障)滤光片,能够选择性地隔离橙色到红色光谱区域内的荧光激发。这些互补滤光片组合的激发波长范围为532至587纳米,通带宽度为40和55纳米。两种组合都使用相同的长通二色镜(切入595纳米)。两个尼康黄色激发滤光片组包含带宽为60和75纳米的带通势垒滤光片。
红色激发 - 尼康红色激发荧光滤光片组合类别包括一个单独的模块,该模块结合了一个带通激发(屏障)滤光片,能够选择性地隔离在深红色至近红外光谱区域中发生的荧光激发。屏障滤波器的通带以700纳米为中心,带宽为75纳米(663至738纳米)。涵盖橙色和红色波长的宽60纳米激发带覆盖590至650纳米的光谱范围。所述的cy5 hyq组合采用具有长通二色镜的切口上的660个纳米,这比带通激发截止更高10个纳米的波长。
黄色荧光蛋白(yfp)激发 - 尼康黄色荧光蛋白荧光滤光片类别包含一个高性能的平衡组合,可有效地将三个绿色荧光蛋白(gfp)滤光片组提供的荧光蛋白检测功能扩展到更长的增强波长gfp的黄色变体(yfp和eyfp)。该yfp hyq滤光片组合采用相对较窄的通带激发和激发(屏障)滤光片,其设计与增强型黄色荧光蛋白的特定光谱特征相对应,并使yfp衍生物的荧光激发能够与其他荧光蛋白分开进行评估。
双通激发 - 尼康双通荧光滤光片产品组合包括三个精心平衡的组合,其中包含双通通激发和激发(阻挡)滤光片,这些滤光片被合并到一个元件中,该元件能够同时从两个荧光团中选择性地分离出荧光激发。每个滤光片组都针对特定的荧光染料对而设计,以实现良好性能,尽管它们对具有相似吸收和激发光谱曲线的荧光探针对也同样有效。利用精确的波段选择,在反射和透射区域之间进行陡峭的带通过渡,可以以小的交叉干扰将多个激发和激发信号分开。
三通激发 - 尼康提供的三通激发带荧光滤光片包括两个平衡块,其中包含三通带通激发和激发(阻挡)滤光片,能够同时从三个荧光团中选择性分离出荧光。每个滤波器组都针对特定的三荧光染料套件而设计,以实现良好性能,尽管它们对于具有相似吸收和激发光谱曲线的备用探头组合也同样有效。利用精确的波段选择,在反射和透射区域之间进行陡峭的带通过渡,将多个激发和激发信号分离开来,从而将干扰降到低。
hyq激发 -尼康hyq荧光滤光片组合组包含四个精心平衡的高性能套件,所有这些套件均集成了带通激发(屏障)滤光片,用于选择性隔离有限波长范围内的荧光。每个hyq滤镜组的名称都反映了其主要设计的荧光染料的名称,但是在其各自的激发范围内,每种组合都可以应用于各种合适的荧光染料。
尼康荧光滤光片组合列表尼康采用的滤镜命名法可追溯到1990年代初。当时,所有尼康互补滤镜组合都是使用硬涂层溅射技术生产的,但是许多当前可用的滤镜都利用了较新的较软的镀膜方法。尽管软涂层较易受湿气和热降解的影响,并且比硬涂层滤光片必须更小心地处理,但它们显示出更高的阻隔值光学密度,并且更易于微调特定的波长带。了解尼康滤镜组合代码的命名法提供了一种机制,可以快速确定特定的组对于特定的荧光团是否可以充分发挥作用。
尼康专有的字母数字滤波器名称代码中的个字母表示波长激发光谱区域(例如uv,v,b和g,分别是紫外线,紫罗兰,蓝色和绿色的简单缩写)。激发代码后的数字与激发滤波器的通带宽度有关:1表示窄带激发,2表示中频带和宽带激发,3表示非常宽带的激发。后,激发带通大小数字后面的一个或多个字母标识了屏障滤波器的特性。代号字母a表示截止波长的标准长通屏障滤光片,而b表示长通激发滤光片的截止波长值较高。带通激发滤波器用字母e标识(指术语“增强型”),以表示它们在消除交叉方面的优越性能。在e/c激发块是设计为与特定的探针,如dapi,fitc,tritc,和德克萨斯红良好性能软涂层干扰的组合。
紫外线激发uv-2e/c - uv-2e/c滤光片组合设计为用于紫外线荧光的尖锐截止滤光片。滤波器是软涂层类型的,旨在产生高信噪比。此组合中使用的窄带通屏障滤光片旨在显着减少或*消除绿色和红色可见波长。
uv-1a - uv-1a组合设计为用于紫外线荧光的滤光片,具有窄的激发带通(仅使用汞光谱的i线)和窄的二色镜通带,可大程度地减少自发荧光和光漂白。
uv-2a - uv-2a滤光片组合被设计为用于紫外线荧光的标准滤光片,并且是尼康调色板中设置的亮的紫外线滤光片。
uv-2b - uv-2b组合被设计为用于紫外线荧光的通用滤光片,与uv-2a滤光片组合相比,它提供了更暗的背景和更好的对比度。
紫罗兰色激发v-1a - v-1a滤光片组合设计为带窄带通区域的紫光荧光激发滤光片,可大程度地减少自发荧光。长通激发滤光片允许检测各种荧光染料波长。
v-2a - v-2a组合设计为多功能性标准紫色荧光滤光片。使用中等激发带通和长通激发滤光片,所产生的图像是尼康紫色滤光片组中亮的。
bfp(蓝色荧光蛋白) - bfp滤波器块结合了窄的激发带用带通的激发滤光片,以限制自体荧光以及来自红色和绿色的荧光团排除激发的检测。这种滤光片组合非常适合对蓝色荧光蛋白衍生物成像。
蓝紫色激发bv-1a -bv-1a滤光片组合设计为用于蓝紫色荧光激发的滤光片,其带宽非常窄,可大程度地减少样品的自发荧光。长通激发滤光片允许检测各种荧光染料波长。
bv-2a - bv-2a组合设计为标准的蓝紫色荧光滤光片。使用中等激发滤光片带通和长通激发滤光片,这种组合所产生的图像是尼康蓝紫色滤光片组中亮的。
bv-2b - bv-2b组合设计为蓝紫色荧光的滤光片,与标准bv-2a滤光片组合相比,可提供更暗的背景和更高的对比度。
cfp(青色荧光蛋白) - cfp滤波器块结合了一个带通的激发滤光片,以限制自体荧光,以及排除的红色,黄色和绿色的许多发光的荧光染料检测窄激发带宽。
蓝色激发b-1a - b-1a滤光片组合设计有较窄的激发通带,以减少自发荧光和光致漂白。长通屏障(激发)滤光片能够传输来自绿色,黄色,橙色和红色荧光团的信号,这些信号在对应于激发带通窗口的上部蓝色波长区域中具有明显的吸收。
b-2a - b-2a滤镜组合是尼康蓝光激发组中设置的标准滤镜。与b-1a组合相比,其设计结合了宽的激发带通,从而为荧光团提供了更大的吸收窗口,并且该装置还具有较低的双色镜和阻隔滤光片截止波长,与b相比,产生了增强的图像亮度-1a滤波器组。
b-3a - b-3a滤光片组合使用了与b-1a套装相同的双色镜和长通激发滤光片,但采用了非常宽的激发带,使其适用于卤钨灯。这种结合使得能够传输来自绿色,黄色,橙色和红色荧光团的大量信号,这些荧光团在蓝色波长区域具有吸收带。
b-1e - b-1e滤光片组合是蓝色荧光激发系列中三组之一,该滤光片与带通滤光片相反,是利用带通的,主要区别在于激发带的宽度。每个带通屏障滤波器组提供的性能均适用于对标有异硫氰酸荧光素(fitc)的标本进行成像(绿色激发),同时阻止黄色,橙色和红色激发。的b-1e组合与所述带通激发(阻挡)滤波器结合使用窄带通激发滤光片。
b-2e - b-2e滤光片组合采用宽激发带通,其波长比b-1e组的激发带低20纳米。b-1e和b-2e滤镜组合中的双色镜和带通屏障滤镜规格相同。
b-2e/c - b-2e/c激发块组合使用的介质宽度的激发带结合相比略微降低激发带通波长区域b-1e和b-2e集。该性能经过优化,可检测多种标记实验中使用的多种流行的荧光团,同时提供了更好的黄色到红色波长的排除。
绿色激发g-1a-用于绿色波长激发的g-1a滤光片组合设计有狭窄的激发带通,以减少自发荧光并大程度地减少样品辐射的暴露。长通屏障(激发)滤光片能够传输黄色,橙色和红色荧光团的信号,这些荧光团在中心绿色波长区域具有明显的吸收率。
g-1b - g-1b滤波器组合具有相似部件简档的g-1a组,纳入窄激发带通,以减少自体荧光和试件破坏,但具有不同的二色镜和激发滤光器切口上的波长。激发滤光片截止到较长波长的偏移会产生图像,由于增加了对黄色激发的阻挡,因此图像显得较红。
g-2a - g-2a滤光片组合配置为标准的绿色滤光片模块,具有宽的激发通带,适用于由绿色波长激活的大量荧光团。长通激发滤光片允许检测比黄色光谱区域更长的所有荧光波长。
g-2b - g-2b滤波器组合的设计具有与g-2a滤波器模块相同的激发特性。但是,在使用更高的双色镜和激发滤光片截止波长的情况下,g-2b套装可产生背景更暗,颜色向红色偏移的图像。
g-2e/c - g-2e/c滤光片组合设计用于良好性能,可与多种用于多种标记实验的流行荧光探针配合使用。窄激发带通提供选择性激发,而带通激发滤光片则减少了以红色和近红外激发的荧光团的干扰。
cy3 hyq - cy3绿色激发滤光片组合的配置与g-2e/c装置相似。但是,随着激发通带的扩大和激发带通的扩大以涵盖更低的波长,cy3滤光片块产生的图像会更亮一些,并反映出更多黄色光谱区域激发的检测。
黄色激发y-2 /c - 用于黄色波长激发的y-2e/c滤光片组合被设计为与德州红和cy3.5一起使用的滤光片套件,尽管其激发带宽跨越了大多数黄色波长(重叠一部分) (绿色区域),则该套色可以与一系列其他荧光染料一起使用。带通屏障滤光片可传输来自激发橙色和橙色红色荧光的信号,同时消除大多数红色和近红外激发。
texas red hyq - texas red hyq滤镜组合具有与y-2e/c装置相似的组件配置,但具有更宽的激发和激发带通窗,这使它可以传输更多的能量并产生相对明亮的图像。由于激发滤光器通带扩展到红色光谱区域中的较长波长,因此所得图像还反射了其他红色荧光信号。
红色激发cy5 hyq - 用于红色波长激发的cy5 hyq滤光片组合旨在提供荧光团cy5的高能量激发,尽管宽激发范围(黄橙色至红色)允许该装置与各种荧光染料一起使用。反射区和透射区之间的陡峭滤波器过渡可与宽带宽使用带来的高亮度水平相结合,从而保持信号分离。带通屏障滤波器将信号从远红外传输到近红外,该波长范围是使用电子检测器(例如不带红外滤光片的光电倍增管和ccd摄像机)有效地检测到的。
双通激发dapi-fitc - dapi-fitc滤光片组合设计用于同时检测荧光染料dapi和fitc或具有类似光谱特性的其他配对荧光探针的激发。双重窄的激发带和激发带对应于紫色激发的特定区域以及相应的蓝色激发,并且蓝色激发耦合到绿色激发。
fitc-tritc - fitc-tritc滤光片组合设计用于同时检测荧光染料fitc和tritc或光谱相似的探针对的激发。带通激发和激发滤波器允许两个信号通道,一个对应于蓝色激发和绿色激发的特定狭窄区域,另一个对应于绿色激发和橙红色激发。
fitc-texas red - fitc-德克萨斯红滤波器组合被设计有用于蓝色激发和绿色激发稍微不同的带通区相比,当fitc-tritc集,允许fitc的更有效的激发。这些偏移符合德克萨斯红(绿色激发;红色激发)波段的波长范围稍高的情况。多个带通区域以小的串扰提供了良好检测,可同时显示fitc和texas red或光谱相似的荧光团对。
三通激发dapi-fitc-tritc - dapi-fitc-tritc滤光片组合旨在用于同时检测荧光染料dapi,fitc和tritc或具有相似光谱特性的其他探针组合的激发。三个窄的激发带和激发带分别对应于具有相应的蓝色激发,耦合到绿色激发的蓝色激发以及具有橙红色激发的绿色激发的紫色激发的特定区域。
dapi-fitc-texas red - 与标准dapi-fitc-tritc相比,dapi-fitc-德克萨斯红滤光片组合设计的通带区域略有不同,紫色激发-蓝色激发,蓝色激发-绿色激发。相对于tritc的值,此设计旨在更好地符合texas red所需的更高激发和激发波长。多个带通区域可提供良好的检测,同时具有小的交叉和噪声,可同时显示dapi,fitc和texas red或光谱相似的荧光团组合。
hyq激发块组合tritc hyq - 用于绿色波长激发的tritc hyq滤光片组合旨在提高tritc和dii等荧光染料的性能。与本应用中通常使用的一些绿色激发光相比,更宽的激发通带和红移双色镜截止信号为这些荧光团提供了更高的信号水平,并允许更好地检测dsred荧光蛋白变体和远红色荧光hcred蛋白。
cy3 hyq - cy3 hyq绿色激发滤光片组合具有与g-2e/c装置相似的组件特性,尽管它通过扩展的通带窗产生增加的激发和激发能量。此外,激发通带延伸到较低的波长(进入黄色),从而导致图像既明亮,又偏黄橙色。这是用于检测花青荧光探针cy3的推荐滤光片组合,尤其是在多标记技术中,它可以减少来自远红光和近红外光的荧光团的干扰。
texas red hyq - texas red hyq滤光片组合经过优化,可与荧光探针texas red和cy3.5配合使用,其激发和激发通带比类似的y-2e/c集宽。与y-2e/c装置相比,由于得到的信号电平更高,并且激发通带扩展到了更长的波长,因此这种组合产生的图像在色调上更明亮,更红。在德克萨斯红hyq组合提供了一种用于发光探针在超过的上限波长改进的性能的y 2e / c的激发带,同时限制从荧光团激发的深红色和近红外的干扰。
cy5 hyq - cy5 hyq滤光片组合是为高能红色波长激发而设计的尼康套装,尽管针对荧光团cy5进行了优化,但宽泛的黄橙色至红色激发范围适用于使用各种荧光染料。与激发滤光片通带相对应的在从近红外到近红外波长产生的荧光在很大程度上是人眼看不见的,而有效的检测则需要使用光电倍增管或ccd摄像机。宽的滤波器带通区域,加上陡峭的导通和截止过渡,可保持hyq滤波器系列的大信号分离度和信噪比。
荧光蛋白激发块组合endow gfp长通激发(fgp(r)-lp) - endow gfp长通激发滤波器的组合是endowgfp带通滤波器组的长通版本和由杜克大学的sharyn endow博士设计。该滤光片组可用于利用wtgfp和egfp进行荧光研究。与该系列中的其他滤光片一起,设计该套件的目的是增加次级荧光强度(亮度),而不会相应地增加噪声水平。通过增加激发和激发滤波器中的干涉腔的数量来创建更陡峭的通带,从而使滤波器频谱之间更加接近。由此产生的更宽和更陡峭的滤光片光谱使该装置可以提供更多的激发并捕获更多的荧光强度。
endow gfp带通激发(fgp(r)-bp) - endow gfp带通激发(fgp(r)-bp)滤波器的组合是endowgfp长通滤波器组的带通版本和由杜克大学的sharyn endow博士设计。该滤光片组可用于利用wtgfp和egfp进行荧光研究,并且是分布广的gfp滤光片组之一。
piston gfp带通激发 - piston gfp带通激发滤波器组合是范德比尔特大学的david piston博士设计的带通滤波器组。激发滤光片具有窄带通,可用于定量egfp(绿色荧光蛋白)荧光,同时避免波长超过540纳米的自发荧光。
黄色荧光蛋白带通激发(yfp hyq) - 尼康黄色荧光蛋白yfp hyq滤光片套件设计用于在蓝绿色光谱区域中的窄(20纳米)波长带上透射激发光,并激发绿色到黄色在30纳米带通区域内进行检测。该模块经过优化,可用于yfp成像,同时在双重染色技术中仍可区分青色荧光蛋白。

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