GST-琼脂糖凝胶4B预装柱使用说明
gst-琼脂糖凝胶4b预装柱使用说明
相关介绍：
gst-琼脂糖凝胶4b是一种将谷胱-甘肽键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析分离介质，主要用于谷胱-甘肽转移酶标记蛋白（gst融合蛋白）、谷胱-甘肽转移酶和谷胱-甘肽依赖蛋白的分离纯化，通过一步亲和层析，就能获得高纯度的蛋白。与gst-琼脂糖凝胶ff相比，gst-琼脂糖凝胶4b能获得更高的载量。
品 名：gst-琼脂糖凝胶4b
英文名：glutathione nupharose 4b
规 格：20 ml，100 ml
运 输：2 ~ 30℃，常压、避光
贮 存：20%乙醇，2~8℃
使用方法：
1. 装柱
1.1 根据分离目标性质配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。
1.2 将凝胶抽干，并用蒸馏水洗涤2次去除保存的乙醇，用蒸馏水配成匀浆并脱气。
1.3 将层析柱垂直固定，底端用水或缓冲液润湿并保持一段液位。
1.4 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，使凝胶在柱内自由沉降。
1.5 连结好柱子顶端活动柱头，打开蠕动泵，让缓冲液用使用时操作流速流过5柱体积，再使用1.5倍的操作流速流过5柱体积，调节适配柱头，使其尽量贴近胶面，最后用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
注意：（1）所有操作过程不能引入气泡，保证装胶的均匀度。（3）如无条件做1.2，填料层有气泡，可进行2次装柱，去除保存的乙醇和气泡。（4）乙醇等试剂配制的溶液需要脱气。
2. 平衡
将平衡缓冲液以操作流速平衡层析柱，观察检测器的变化，直到电导、ph等参数不变。推荐的结合平衡缓冲液为：10mm pbs (140mm nacl, 2.7mm kcl, 10mm na2hpo4, 1.8mm kh2po4, ph 7.4)。
3. 上样
切换转换阀进行上样，上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择，也可进行线性实验找到最佳上样量；样品的预处理：置换缓冲液，澄清过滤（0.45、0.22μm）等。
4. 冲洗
用2-3个柱体积的平衡缓冲液冲洗上样后的层析柱，观察检测器的变化，直到电导、ph等参数不变，此时未交换的组分被清洗出去。
5. 洗脱
一般推荐用10mm还原型谷胱-甘肽溶液（可含缓冲成分）进行洗脱。推荐的洗脱缓冲液为：50mm tris-hcl, 10 mm 还原型谷胱-甘肽(gsh), ph 8.0。
6. 再生
用蒸馏水按操作流速冲洗3-5个柱体积，接着用平衡液洗到平衡3-5个柱体积。
若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（cip）除去。
7. 在位清洗(cip)
去除沉淀和变性蛋白：用2cv 6m盐酸胍清洗，立即用10mm pbs(ph7.4)洗5cv。
去除强疏水蛋白：用3-4cv 70%乙醇清洗，立即用10mm pbs(ph7.4)洗5cv。
关键词：层析柱 蠕动泵
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品 名：gst-琼脂糖凝胶4b
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规 格：20 ml，100 ml
运 输：2 ~ 30℃，常压、避光
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1. 装柱
1.1 根据分离目标性质配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。
1.2 将凝胶抽干，并用蒸馏水洗涤2次去除保存的乙醇，用蒸馏水配成匀浆并脱气。
1.3 将层析柱垂直固定，底端用水或缓冲液润湿并保持一段液位。
1.4 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，使凝胶在柱内自由沉降。
1.5 连结好柱子顶端活动柱头，打开蠕动泵，让缓冲液用使用时操作流速流过5柱体积，再使用1.5倍的操作流速流过5柱体积，调节适配柱头，使其尽量贴近胶面，最后用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
注意：（1）所有操作过程不能引入气泡，保证装胶的均匀度。（3）如无条件做1.2，填料层有气泡，可进行2次装柱，去除保存的乙醇和气泡。（4）乙醇等试剂配制的溶液需要脱气。
2. 平衡
将平衡缓冲液以操作流速平衡层析柱，观察检测器的变化，直到电导、ph等参数不变。推荐的结合平衡缓冲液为：10mm pbs (140mm nacl, 2.7mm kcl, 10mm na2hpo4, 1.8mm kh2po4, ph 7.4)。
3. 上样
切换转换阀进行上样，上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择，也可进行线性实验找到最佳上样量；样品的预处理：置换缓冲液，澄清过滤（0.45、0.22μm）等。
4. 冲洗
用2-3个柱体积的平衡缓冲液冲洗上样后的层析柱，观察检测器的变化，直到电导、ph等参数不变，此时未交换的组分被清洗出去。
5. 洗脱
一般推荐用10mm还原型谷胱-甘肽溶液（可含缓冲成分）进行洗脱。推荐的洗脱缓冲液为：50mm tris-hcl, 10 mm 还原型谷胱-甘肽(gsh), ph 8.0。
6. 再生
用蒸馏水按操作流速冲洗3-5个柱体积，接着用平衡液洗到平衡3-5个柱体积。
若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（cip）除去。
7. 在位清洗(cip)
去除沉淀和变性蛋白：用2cv 6m盐酸胍清洗，立即用10mm pbs(ph7.4)洗5cv。
去除强疏水蛋白：用3-4cv 70%乙醇清洗，立即用10mm pbs(ph7.4)洗5cv。
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