实验时一抗二抗选择要点

怎样选择适合你实验需要的抗体?现在来介绍常用抗体一抗二抗选择要点:
1. 一抗选择要点:
1. 确定抗体的名字。注意中英文名字、它名、亚型等信息。
2. 确定你的实验类型。elisa,wb,ihc,icc,还是facs。一般抗体的说明书都会列出该抗体经验证过适用于何种实验的类型,如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种实验验证,请根据说明书列出的已验证的类型来选择适合你实验的抗体。
3. 确定实验样本的种属。human,mouse,还是rat。一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种物种实验,请根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验的抗体。
4. 样本蛋白的结构性质。了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体,待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性,蛋白空间构象的改变,会影响抗体的免疫亲和反应。
5.单多克隆抗体的选择。市面上的抗体还是以多克隆抗体为主,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。
二抗选择要点:
1.种属来源。主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
2.标记物的选择。有hrp、biotin、荧光素等标记物。一般sp三步法二抗选择biotin标记的二抗,以与后面的sp结合反应,而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗,如罗丹明、fitc、cy3等常用荧光素。

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