分子生物学常用试剂的配制
分子生物学常用试剂的配制
琼脂糖凝胶的配制
根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖，加入相应电泳缓冲液中，用微波炉加热煮沸至琼脂糖*溶解，加入适量eb混匀，适当冷却后倾入凝胶铸槽中，插入梳子，凝胶厚度不超过梳孔，如有气泡产生则用玻璃棒驱除，不能过早拔除梳子，应待凝胶*凝结后才能拔除梳子。
3.p1、p2、p3的配制p1的配制：在800ml去离子水中溶入tris碱6.06g，na2edta?2h2o3.72g，用hcl调整ph至8.0，用去离子水调整容积至1升，每升p1内加入rnasea100mg。
p2的配制：在950ml去离子水中溶入naoh8.0g，20%sds50ml，调整容积至1升。
p3的配制：在500ml去离子水中溶入*294.5g，用冰醋酸调整ph值至5.5，用去离子水调整容积至1升。
4.常用缓冲液：
te
ph7.4
10mmol/ltris?cl(ph7.4)
1mmol/ledta(ph8.0)
ph7.6
10mmol/ltris?cl(ph7.6)
1mmol/ledta(ph8.0)
ph8.0
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
1mmol/ledta(ph8.0)
ste(亦称ten)
0.1mmol/lnacl
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
1mmol/ledta(ph8.0)
stet
0.1mmol/lnacl
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
1mmol/ledta(ph8.0)
5%tritonx-100
tnt
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
150mmol/lnacl
0.05%tween20
电泳缓冲液
tris-乙酸(tae)：50×浓贮存液(每升)：242gtris碱
57.1ml冰乙酸
100ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
使用时再稀释50倍。
tris-磷酸(tpe)：10×浓贮存液(每升)：108gtris碱
15.5ml85%磷酸(1.679g/ml)
40ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
使用时再稀释10倍。
tris-硼酸(tbe)：5×浓贮存液(每升)：54gtris碱
27.5g硼酸20ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
使用时再稀释10倍。
碱性缓冲液：1×使用液(每升)：5ml10mol/lnaoh
2ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
tris-*：5×浓贮存液(每升)：15.1gtris碱
94g*(电泳级)(ph8.3)
50ml10%sds(电泳级)
2×sds凝胶加样缓冲液
100mmol/ltris?hcl(ph6.8)
200mmol/l二硫苏糖醇(dtt)
4%sds(电泳级)
0.2%溴酚蓝
20%甘油
30%丙烯酰胺：
将29g丙烯酰胺和1gn,n’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37℃溶解之，补加
水至终体积为100ml。用nalgene滤器(0.45孔径)过滤除菌查证该溶液的ph值应不大于7.0，置棕色瓶中
保存于室温。
10mol/l乙酸铵：
把770g乙酸铵溶解于800ml水中，加水定容至1l后过滤除菌。
1mol/lcacl2：
在200ml纯水中(milli-q水或相当级别的水)溶解54gcacl2?6h2o，用0.22滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
2.5mol/lcacl2：
在20ml蒸馏水中溶解13.5gcacl2?6h2o，用0.22滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
1mol/l二硫苏糖醇(dtt)：
用20ml0.01mol/l乙酸钠溶液(ph5.2)溶解3.09gdtt，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
0.5mol/ledta(ph8.0)：
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠(edta-na?h2o)，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用naoh调节溶液的ph值至8.0，然后定容至1升，分装后高压灭菌备用。
溴化乙锭(10mg/ml)：
在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其*溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
1mol/lmgcl2：
在800ml水中溶解203.3gmgcl2?6h2o，用水定容至1升，分装成小份并高压灭菌备用。
酚：：
把酚和等体积混合后用0.1mol/ltris?cl(ph7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/ltris?cl(ph7.6)液层，保存于4℃。
磷酸缓冲盐溶液(pbs)：
在800ml蒸馏水中溶解8gnacl、0.2gkcl、1.44gna2hpo4和0.24gkh2po4，用hcl调节溶液的ph值至7.4，加水定容至1升，高压蒸汽灭菌20min。保存于室温。
乙酸钾溶液(用于碱裂解)：
在60ml5mol/l乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水，即成钾浓度为3mol/l而乙酸根浓度5mol/l的溶液。
3mol/l乙酸钠(ph5.2和7.0)：
在800ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节ph值至5.2或用稀乙酸调节ph至7.0，加水定容至1升，分装后高压灭菌。
1mol/ltris：
在800ml水中溶解121.1gtris碱，加入浓hcl调节ph至所需值。
phhcl
7.470ml
7.660ml
8.042ml
应使溶液冷至室温后方可后调定ph值，加水定容至1升，分装后高压灭菌。
tris缓冲盐溶液(tbs)：
在800ml蒸馏水中溶解8gnacl、0.2gkcl和3gtris碱，加入0.015酚红并用hcl调ph值至7.4，用蒸馏水定容至1升，分装后在15lbf/in2(1.34×105pa)高压下蒸汽灭菌20分鈡，于室温保存。
5mmol/lnh4ac溶液：
秤取乙酸铵192.7g，加重蒸水250ml混匀，加重蒸水定容至500ml，1.1kg/cm2灭菌20min。
10mg/mlbsa(小牛血清白蛋白)溶液：
秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml灭菌重蒸水中。置4℃冰箱贮存备用。
10%十二烷基硫酸钠(sds)：
在900ml水中溶解100g电泳级sds，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的ph值至7.2，加入水定容至1l，分装备用。
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3.p1、p2、p3的配制p1的配制：在800ml去离子水中溶入tris碱6.06g，na2edta?2h2o3.72g，用hcl调整ph至8.0，用去离子水调整容积至1升，每升p1内加入rnasea100mg。
p2的配制：在950ml去离子水中溶入naoh8.0g，20%sds50ml，调整容积至1升。
p3的配制：在500ml去离子水中溶入*294.5g，用冰醋酸调整ph值至5.5，用去离子水调整容积至1升。
4.常用缓冲液：
te
ph7.4
10mmol/ltris?cl(ph7.4)
1mmol/ledta(ph8.0)
ph7.6
10mmol/ltris?cl(ph7.6)
1mmol/ledta(ph8.0)
ph8.0
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
1mmol/ledta(ph8.0)
ste(亦称ten)
0.1mmol/lnacl
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
1mmol/ledta(ph8.0)
stet
0.1mmol/lnacl
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
1mmol/ledta(ph8.0)
5%tritonx-100
tnt
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
150mmol/lnacl
0.05%tween20
电泳缓冲液
tris-乙酸(tae)：50×浓贮存液(每升)：242gtris碱
57.1ml冰乙酸
100ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
使用时再稀释50倍。
tris-磷酸(tpe)：10×浓贮存液(每升)：108gtris碱
15.5ml85%磷酸(1.679g/ml)
40ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
使用时再稀释10倍。
tris-硼酸(tbe)：5×浓贮存液(每升)：54gtris碱
27.5g硼酸20ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
使用时再稀释10倍。
碱性缓冲液：1×使用液(每升)：5ml10mol/lnaoh
2ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
tris-*：5×浓贮存液(每升)：15.1gtris碱
94g*(电泳级)(ph8.3)
50ml10%sds(电泳级)
2×sds凝胶加样缓冲液
100mmol/ltris?hcl(ph6.8)
200mmol/l二硫苏糖醇(dtt)
4%sds(电泳级)
0.2%溴酚蓝
20%甘油
30%丙烯酰胺：
将29g丙烯酰胺和1gn,n’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37℃溶解之，补加
水至终体积为100ml。用nalgene滤器(0.45孔径)过滤除菌查证该溶液的ph值应不大于7.0，置棕色瓶中
保存于室温。
10mol/l乙酸铵：
把770g乙酸铵溶解于800ml水中，加水定容至1l后过滤除菌。
1mol/lcacl2：
在200ml纯水中(milli-q水或相当级别的水)溶解54gcacl2?6h2o，用0.22滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
2.5mol/lcacl2：
在20ml蒸馏水中溶解13.5gcacl2?6h2o，用0.22滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
1mol/l二硫苏糖醇(dtt)：
用20ml0.01mol/l乙酸钠溶液(ph5.2)溶解3.09gdtt，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
0.5mol/ledta(ph8.0)：
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠(edta-na?h2o)，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用naoh调节溶液的ph值至8.0，然后定容至1升，分装后高压灭菌备用。
溴化乙锭(10mg/ml)：
在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其*溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
1mol/lmgcl2：
在800ml水中溶解203.3gmgcl2?6h2o，用水定容至1升，分装成小份并高压灭菌备用。
酚：：
把酚和等体积混合后用0.1mol/ltris?cl(ph7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/ltris?cl(ph7.6)液层，保存于4℃。
磷酸缓冲盐溶液(pbs)：
在800ml蒸馏水中溶解8gnacl、0.2gkcl、1.44gna2hpo4和0.24gkh2po4，用hcl调节溶液的ph值至7.4，加水定容至1升，高压蒸汽灭菌20min。保存于室温。
乙酸钾溶液(用于碱裂解)：
在60ml5mol/l乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水，即成钾浓度为3mol/l而乙酸根浓度5mol/l的溶液。
3mol/l乙酸钠(ph5.2和7.0)：
在800ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节ph值至5.2或用稀乙酸调节ph至7.0，加水定容至1升，分装后高压灭菌。
1mol/ltris：
在800ml水中溶解121.1gtris碱，加入浓hcl调节ph至所需值。
phhcl
7.470ml
7.660ml
8.042ml
应使溶液冷至室温后方可后调定ph值，加水定容至1升，分装后高压灭菌。
tris缓冲盐溶液(tbs)：
在800ml蒸馏水中溶解8gnacl、0.2gkcl和3gtris碱，加入0.015酚红并用hcl调ph值至7.4，用蒸馏水定容至1升，分装后在15lbf/in2(1.34×105pa)高压下蒸汽灭菌20分鈡，于室温保存。
5mmol/lnh4ac溶液：
秤取乙酸铵192.7g，加重蒸水250ml混匀，加重蒸水定容至500ml，1.1kg/cm2灭菌20min。
10mg/mlbsa(小牛血清白蛋白)溶液：
秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml灭菌重蒸水中。置4℃冰箱贮存备用。
10%十二烷基硫酸钠(sds)：
在900ml水中溶解100g电泳级sds，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的ph值至7.2，加入水定容至1l，分装备用。
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