多酚氧化酶测试盒的粗酶液提取
多酚氧化酶测试盒的粗酶液提取
（多酚氧化酶polyphenol oxidase，ppo，分光光度测定法）
一、测定原理：
多酚氧化酶能够催化底物酚产生醌，后者在420nm处有特
征性光吸收。
二、测定意义：
ppo主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种
含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，
与果蔬加工、茶叶品质等密切相关；同时酚类物质对病原微生物
有抑制和杀伤作用，具有一定的抗病能力。
三、试剂盒组成(50t/24样)：
四、自备仪器或用品：
可见光分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、
1cm光径比色皿、研钵、蒸馏水、冰。
五、粗酶液提取:
1、组织样本：组织称重（g）：提取液体积（ml）为1:5或
1:10的比例（例如取0.2g组织，加1ml提取液或0.1g
组织加1ml提取液），进行冰浴匀浆；8000转/分钟常温
离心10min（或4000转/分钟离心10min后取上清再4000
转/分钟离心10min），取上清待测（取部分上清液于90℃
以上沸水浴中反应5min作为除非处理的粗酶液上清）。
2、血清（浆）或果汁样本：取血清（浆）或果汁体积（ml）：
提取液体积（ml）为1:4或1：9的比例（例如取0.2ml
血清（浆）或果汁加入0.8ml提取液，或者取0.1ml血
清（浆）或果汁加入0.9ml提取液），涡旋混匀抽提1min；
8000转/分钟常温离心10min（或4000转/分钟离心10min
后取上清再4000转/分钟离心10min），取上清待测（取
出部分上清液于90℃以上沸水浴中反应5min作为除非
处理的粗酶液上清）。
3、细菌或培养细胞：可用称重法或细胞计数法,详情参考注
意事项。
八、注意事项:
1、细菌或细胞样本前处理：a:称重法：提取时可以先取离心
管用万分之一天平称重，再收集细菌或细胞到离心管内，
1000转/分钟离心5min后弃上清，再次称重，减去空离心
管重量，再按2（mg）：1000（μl）或1（mg）：1000（μl）
的比例加入提取液，超声破碎（冰浴，功率20%或200w，
超声3s、间隔10s，重复30次），8000转/分钟4℃离心
10min，取上清待测，结果按照组织计算方法计算；b：细
胞个数法：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；
按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积为500～1000:1
的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声
波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200w，超声3s、
间隔10s，重复30次）；8000转/分钟常温离心10min，取
上清待测
2、粗酶液提取完，吸出一部分在90℃以上水浴中煮沸5min，
取出流水冷却，作为对照管煮沸的上清用。
3、试剂一在使用前先混匀使其分散后，再吸取进行提取。
4、本实验组织/细胞样本用试剂一提取很重要，提取后的粗酶
液除了测定蛋白以外，不能用于测定其他指标，以防止产
生干扰。
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离心10min（或4000转/分钟离心10min后取上清再4000
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清（浆）或果汁加入0.9ml提取液），涡旋混匀抽提1min；
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1000转/分钟离心5min后弃上清，再次称重，减去空离心
管重量，再按2（mg）：1000（μl）或1（mg）：1000（μl）
的比例加入提取液，超声破碎（冰浴，功率20%或200w，
超声3s、间隔10s，重复30次），8000转/分钟4℃离心
10min，取上清待测，结果按照组织计算方法计算；b：细
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的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声
波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200w，超声3s、
间隔10s，重复30次）；8000转/分钟常温离心10min，取
上清待测
2、粗酶液提取完，吸出一部分在90℃以上水浴中煮沸5min，
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3、试剂一在使用前先混匀使其分散后，再吸取进行提取。
4、本实验组织/细胞样本用试剂一提取很重要，提取后的粗酶
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