快速T4 DNA连接酶质量控制&使用说明
快速t4 dna连接酶由携带t4噬菌体基因30的大肠杆菌产生。这种酶催化双链dna或rna的5'-磷酸基团和3'-羟基之间形成磷酸二酯键。它可以修复双链dna、rna或dna/rna杂交体中的单链缺口，并可以用粘性或钝端连接dna片段。然而，它对单链核酸没有活性。主要用于酶切dna片段的克隆、定点诱变、pcr产物的克隆和双链dna缺口的修复。快速t4 dna连接酶需要atp作为辅助因子，在室温下仅需10分钟即可完成粘性末端连接反应
艾美捷快速t4 dna连接酶：
cat #: c-bsm205
size: 1000 u
storage: -20°c
酶活性定义：
在37°c下，1个weiss单位的酶在20分钟内催化1 nmol[32ppi]转化为吸附的活性碳。1 weiss单元相当于大约200个内聚末端连接单元（ceu），这类似于在16°c下30分钟内连接50%hindiii消化的λdna片段。
质量控制
残余核酸内切酶活性检测：
在37℃下，将200u的fast t4 dna连接酶与1μg的puc19 dna孵育4小时。未检测到从共价环状dna到刻痕dna的转化。
残留核酸外切酶活性检测：
将酶溶液与双链dna底物在37℃下孵育16小时。在
用dna凝胶电泳法检测双链dna底物。
蓝色/白色屏幕：
在室温下，将puc57 dna/hindii、puc57 dna/pstl或puc57脱氧核糖核酸/smal消化产物与30u快速t4脱氧核糖核酸连接酶孵育1小时。然后将连接产物转化为有能力的大肠杆菌xl1blue细胞。lessthan1%的白色菌落被检测到。
快速t4 dna连接酶使用说明：
1.dna插入片段与载体dna的连接（粘性末端连接）：
① 在冰上制备以下反应混合物：
② 充分混合并短暂离心，然后在22°c下孵育10分钟。
③ 取1-5μl连接产物转化50μl化学活性细胞，或取1-2μl转化50μl电活性细胞。
注：如果连接产物用于电穿孔，则使用柱纯化或氯仿提取来清洁dna，而不是热灭活步骤。
2.dna插入片段与载体dna的连接（钝端连接）
3.线性dna自环化
4.适配器结扎
双链寡核苷酸适配器通常用于在插入片段上产生粘性末端。它们通常含有限制性内切酶识别位点，在连接和酶消化后，这些位点与克隆载体产生相容的末端。有时适配器已经包含与克隆载体兼容的粘性末端，从而消除了在适配器连接后对插入片段进行进一步处理的需要
备注：
快速t4 dna连接酶被高于200mm的nacl或kcl浓度强烈抑制。
连接反应混合物的量不应超过感受态细胞体积的10%，系统中不建议使用过量的fast t4 dna连接酶。
与快速t4 dna连接酶结合的dna可能在琼脂糖凝胶上表现出带转移或涂抹。为了避免这种情况
在这种现象下，可以在装载前对酶进行热灭活，如有必要，可以加入适量的sds。
聚乙二醇（peg）显著提高了钝端结扎的效率。peg 8000的推荐浓度为连接混合物的5%（w/v）。
电穿孔效率可以通过快速t4 dna连接酶的热失活或通过使用柱纯化或氯仿提取进行dna纯化来提高。转化体的数量可以通过将反应时间延长到1小时来增加。
该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。
如何简单分辨轴承质量好坏
醇基燃料重油柴油热值测试仪氧弹的拆卸方法和构造
KEYENCE基恩士光纤式传感器的用途有哪些？
什么是指的水中的有机物质
6ra70西门子直流调速器维修
快速T4 DNA连接酶质量控制&使用说明
收粮食100吨固定式地磅安装,16米-18米挂车用80吨汽车衡,地上衡
校园新风系统使用说明
NASON低压开关SM系列SM-1C-58F-HH出厂设置
煤矿井下矿用自动防水密闭门的工作原理
护套电加热器使用完应该如何正确进行保养？
老化房厂家的优势对比
人工智能“着陆”安防 开启全面产业化运用
智慧配电站房解决方案实现配电站房的智能化管理和运维
钢木实验台使用时有哪几点需要注意
中心刮泥维护方法
进口VESTA电磁阀产品性能要求
涡街流量计平时是如何运行的?它具有哪些之处呢?
星轮高速贴标机,冻干粉贴标机,试剂管贴标机的供标装置有几种形式？
沧州神州盔甲防护罩的技术优越性！
艾美捷快速t4 dna连接酶：
cat #: c-bsm205
size: 1000 u
storage: -20°c
酶活性定义：
在37°c下，1个weiss单位的酶在20分钟内催化1 nmol[32ppi]转化为吸附的活性碳。1 weiss单元相当于大约200个内聚末端连接单元（ceu），这类似于在16°c下30分钟内连接50%hindiii消化的λdna片段。
质量控制
残余核酸内切酶活性检测：
在37℃下，将200u的fast t4 dna连接酶与1μg的puc19 dna孵育4小时。未检测到从共价环状dna到刻痕dna的转化。
残留核酸外切酶活性检测：
将酶溶液与双链dna底物在37℃下孵育16小时。在
用dna凝胶电泳法检测双链dna底物。
蓝色/白色屏幕：
在室温下，将puc57 dna/hindii、puc57 dna/pstl或puc57脱氧核糖核酸/smal消化产物与30u快速t4脱氧核糖核酸连接酶孵育1小时。然后将连接产物转化为有能力的大肠杆菌xl1blue细胞。lessthan1%的白色菌落被检测到。
快速t4 dna连接酶使用说明：
1.dna插入片段与载体dna的连接（粘性末端连接）：
① 在冰上制备以下反应混合物：
② 充分混合并短暂离心，然后在22°c下孵育10分钟。
③ 取1-5μl连接产物转化50μl化学活性细胞，或取1-2μl转化50μl电活性细胞。
注：如果连接产物用于电穿孔，则使用柱纯化或氯仿提取来清洁dna，而不是热灭活步骤。
2.dna插入片段与载体dna的连接（钝端连接）
3.线性dna自环化
4.适配器结扎
双链寡核苷酸适配器通常用于在插入片段上产生粘性末端。它们通常含有限制性内切酶识别位点，在连接和酶消化后，这些位点与克隆载体产生相容的末端。有时适配器已经包含与克隆载体兼容的粘性末端，从而消除了在适配器连接后对插入片段进行进一步处理的需要
备注：
快速t4 dna连接酶被高于200mm的nacl或kcl浓度强烈抑制。
连接反应混合物的量不应超过感受态细胞体积的10%，系统中不建议使用过量的fast t4 dna连接酶。
与快速t4 dna连接酶结合的dna可能在琼脂糖凝胶上表现出带转移或涂抹。为了避免这种情况
在这种现象下，可以在装载前对酶进行热灭活，如有必要，可以加入适量的sds。
聚乙二醇（peg）显著提高了钝端结扎的效率。peg 8000的推荐浓度为连接混合物的5%（w/v）。
电穿孔效率可以通过快速t4 dna连接酶的热失活或通过使用柱纯化或氯仿提取进行dna纯化来提高。转化体的数量可以通过将反应时间延长到1小时来增加。
该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。
如何简单分辨轴承质量好坏
醇基燃料重油柴油热值测试仪氧弹的拆卸方法和构造
KEYENCE基恩士光纤式传感器的用途有哪些？
什么是指的水中的有机物质
6ra70西门子直流调速器维修
快速T4 DNA连接酶质量控制&使用说明
收粮食100吨固定式地磅安装,16米-18米挂车用80吨汽车衡,地上衡
校园新风系统使用说明
NASON低压开关SM系列SM-1C-58F-HH出厂设置
煤矿井下矿用自动防水密闭门的工作原理
护套电加热器使用完应该如何正确进行保养？
老化房厂家的优势对比
人工智能“着陆”安防 开启全面产业化运用
智慧配电站房解决方案实现配电站房的智能化管理和运维
钢木实验台使用时有哪几点需要注意
中心刮泥维护方法
进口VESTA电磁阀产品性能要求
涡街流量计平时是如何运行的?它具有哪些之处呢?
星轮高速贴标机,冻干粉贴标机,试剂管贴标机的供标装置有几种形式？
沧州神州盔甲防护罩的技术优越性！