PCR体系及各类常见PCR辨析
聚合酶链反应（polymerase chain reaction)简称pcr，是一种体外高效扩增特定dna片段的分子生物学技术。该技术的发明人是kary mullis，他从1983年开始研究pcr技术，1985年开始被逐渐采用，成为分子生物学的一项常规手段，并得到了广泛的应用，在临床诊断、生物医学研究和法医学领域都具有重要意义。pcr是在体外模拟体内dna复制的过程，它用加热的办法让需要扩增的dna片段变性解链成两条单链，人工合成的一对引物让它们结合到dna模板（分别结合到两条链上）的两端，dna聚合酶即可以大量复制该模板。了解了pcr的基本过程，再一起来学习一下pcr体系及各类常见pcr辨析吧！
pcr体系
1. 模板
需要研究或扩增的目的核酸分子，dna可以直接扩增，rna需要增加一步逆转录，或者在体系中加逆转录酶一步法进行rt-pcr扩增；
2. 引物
良好设计的引物，是扩增特异性及扩增效率的关键因素之一；
3. taqase
pcr体系的核心组分，taqase的性能，直接决定了扩增体系能否达到实验要求；
针对不同类型的模板、特异性的要求、产物保真度的要求、扩增产物的长度，需要选用能满足对应要求的taqase；所选用的酶如果不匹配，实验是无法成功的；
对一株taqase的性能评价，主要是如下几个方面：扩增效率，扩增速度，保真度，除了催化链延伸之外的其它活性，抗逆性等；
4. dntp
dntp的浓度和质量，也是影响扩增产率的一个重要因素；dntp分子中，含有一个高能磷酸键，是影响dntp稳定性的关键因素，高能磷酸键的断裂也是造成dntp质量不合格的分子层面的原因；
5. buffer
为pcr反应体系提供稳定的工作环境，主要环境因素为ph值，离子强度等；
6. mg++
因为镁离子对taqase活性影响大，所以一般buffer之外，还单独带一管mg++，方便用户灵活调节体系里面mg++浓度；
除了上述六种必要的组分之外，还有较多的工具蛋白或者小分子化合物，能对pcr体系起到相应的作用，这方面累积的研究成果也比较多。
各类常见pcr辨析
1. pcr，通常指的是普通pcr，以双链dna为模板，以dntp为底物，大量（30个循环理论上可以使产物增加到模板初始摩尔数的10的9次方倍）扩增双链dna。产物通常以电泳及凝胶成像方式来分析。
2. qpcr和real-time pcr，指的是实时荧光定量pcr，以dna或cdna为模板，以dntp为底物，以荧光基团为报告分子，收集荧光信号从而对扩增出的dna进行定量分析。为避免和rt-pcr（逆转录pcr）混淆，现在一般不太常用real-time pcr，通常交流，用qpcr指代更明确。
3. rt-pcr，指的是逆转录pcr，以由mrna逆转录成的cdna为模板，以dntp为底物，进行dna的扩增及检测。
4. rt-qpcr，指的是实时荧光定量逆转录pcr，是qpcr+rt-pcr的组合，将总rna或mrna逆转录成cdna后再作为模板，以dntp为底物，进行产物的定量分析。
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4. dntp
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5. buffer
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1. pcr，通常指的是普通pcr，以双链dna为模板，以dntp为底物，大量（30个循环理论上可以使产物增加到模板初始摩尔数的10的9次方倍）扩增双链dna。产物通常以电泳及凝胶成像方式来分析。
2. qpcr和real-time pcr，指的是实时荧光定量pcr，以dna或cdna为模板，以dntp为底物，以荧光基团为报告分子，收集荧光信号从而对扩增出的dna进行定量分析。为避免和rt-pcr（逆转录pcr）混淆，现在一般不太常用real-time pcr，通常交流，用qpcr指代更明确。
3. rt-pcr，指的是逆转录pcr，以由mrna逆转录成的cdna为模板，以dntp为底物，进行dna的扩增及检测。
4. rt-qpcr，指的是实时荧光定量逆转录pcr，是qpcr+rt-pcr的组合，将总rna或mrna逆转录成cdna后再作为模板，以dntp为底物，进行产物的定量分析。
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