D-荧光素钾盐及D-荧光素使用中的常见问题

今天百萤生物为您介绍d-荧光素使用中的常见问题
1、d-荧光素适合做哪些实验?
d-荧光素钾盐和5-氟-荧光素,作为luciferase的作用底物,常用于以下实验:
1.报告基因分析
2.in vivo imaging (动物活体成像)
3.in vitro imaging (细胞体外分析)
4.atp测定
5.其它luciferase及其基因相关的分析和研究工作
2、d-荧光素应用于活体成像的基本原理
细胞中d-荧光素酶参与的化学发光反应遵守酶促反应的基本原理,在底物d-荧光素钾过量的情况下,反应产生的光子数(发光量)与细胞中的d-荧光素酶的量成正相关,从而可以推算出细胞的数量。
3、d-荧光素钾盐溶液的稳定性
d-荧光素钾盐易溶于水和缓冲液,溶解度可高达25mg/ml。一般使用浓度为3-15 mg/ml。
溶液的ph值、溶液中的氧气和保存时间对其保存过程中的稳定性非常重要。当溶液的ph<6.5(发生水解作用)或>7.5(发生消旋化作用,d型转化为l型)的情况下,d-荧光素钾盐相对不稳定。如果溶液中存在少量的氧气,将加速d-荧光素钾的降解速度。
d-荧光素配成溶液后,在佳的保存条件(-80°c,佳ph,无氧气)下,存在固定的降解速度:0.2%/天,因此配成溶液保存的d-荧光素应尽量在1年内使用完。
有水存在的情况下,主要发生消旋化作用,即d-荧光素转化成l-荧光素,有报道称l-荧光素对荧光素酶催化的酶促反应有抑制作用。
4、d-荧光素、d-荧光素na和d-荧光素钾之间的区别
主要区别在于溶解和分散性能。d-荧光素钾盐在水和缓冲液中的溶解度高,且溶解速度较快,故在一般的生物学试验中常用d-荧光素钾盐。
5、d-荧光素钾盐的保存和运输条件
保存条件:≤-20°c,避光,保持干燥。(在不打开包装的条件下,可保存两年时间)。
运输条件:高纯度的d-荧光素钾盐可在短时间内常温条件下保存,运输条件为常温。
原装(没有打开包装)荧光素的包装瓶中充有氩气,保证其稳定性,打开包装后,请严格按照保存条件保存。
d-荧光素钾盐具有易溶于水的特性,其暴露于空气中,易吸潮。在称量过程中,请考虑其易吸潮的特性,先进行温度平衡,再快速称取。
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