一种常用抗原的修复方法介绍
一种常用抗原的修复方法介绍
[一种常用抗原的修复方法介绍]用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片：1)抗原热修复可根据实验室的具体条件，选用微波炉抗原修复、高压锅抗原修复或水浴高温抗原修复。抗原热修复可选用各种缓冲液，如tbs、pbs、重金属盐溶液等，但实验证明，以0.01m枸橼酸盐缓冲液(ph6.[抗原修复修复方法切片抗原缓冲液]
用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片：1)抗原热修复 可根据实验室的具体条件，选用微波炉抗原修复、高压锅抗原修复或水浴高温抗原修复。抗原热修复可选用各种缓冲液，如tbs、pbs、重金属盐溶液等，但实验证明，以0.01m枸橼酸盐缓冲液(ph6.0)效果。请选用我公司提供的zli-9064 枸橼酸盐缓冲液(粉剂)配制，取该粉剂一包溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，其ph值在6.0 ± 0.1，如因蒸馏水本身造成的ph值偏差，请自行调整。
(1)高压热修复 切片脱蜡至水。将1500ml~3000ml的0.01m*缓冲溶液(ph6.0，工作液)或0.001medta(ph8.0)注入不锈钢压力锅中加热至沸腾。切片置于金属架上，放入锅内，使切片位于液面以下，盖锅压阀。当压力锅开始慢慢喷气时(约加热5~6分钟后)，计时1~2分钟，然后将压力锅端离热源，冷水冲至室温后，取下气阀，打开锅盖，取出切片，蒸馏水洗后，pbs洗2分钟×3，下接免疫组化染色步骤。
(2)煮沸热修复 切片脱蜡至水后，放入盛有0.01m*缓冲溶液(ph6.0，工作液)的容器中，并将此容器置于盛有一定数量自来水的大器皿中，电炉上加热煮沸，从小容器的温度到达92℃~98℃起开始计时15~20分钟，然后端离电炉，室温冷却20~30分钟，蒸馏水冲洗，pbs洗，
(3)微波热修复。切片脱蜡至水后，3%h2o2处理10分钟，蒸馏水洗2分钟×3。将切片放入盛有枸橼酸盐缓冲液(工作液)的容器中，置微波炉内加热使容器内液体温度保持在92℃~98℃之间并持续10~15分钟(注意：无论是使用医用或家用微波炉，请根据具体机型酌情设置条件，务必满足以上步骤中对温度和时间的要求)。取出容器，室温冷却10~20分钟(注意：不可将切片从缓冲液中取出冷却，以便使蛋白能够恢复原有的空间构型)。pbs洗，下接免疫组化染色步骤。
适用的抗原有：ar，bax，bcl-2，c-fos，x-jun，c-kit，c-myc，e-cadherin，chromogranin a，cyclin，er，heat shock protein，hpv，ki-67，mdmz，p53，p34，p16，p15，p-glycoprotein，pkc，pr，pcna，ras，rb，topoismeraseⅱ等。酶消化方法 常用0.1%*和0.4%*液。*使用前预热至37℃，切片也预热至37℃，消化时间约为5~30分钟(*的zui终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%至0.25%); *消化37℃时间为30分钟。皂素(saponin)：一般使用浓度为2~10mg/ml的saponin溶液，消化时间为室温孵育30分钟。 适用于被固定遮避的抗原，其中有：collagen，complement，cytokeratin，c-erb-2，gfap，lca，ln等。
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[一种常用抗原的修复方法介绍]用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片：1)抗原热修复可根据实验室的具体条件，选用微波炉抗原修复、高压锅抗原修复或水浴高温抗原修复。抗原热修复可选用各种缓冲液，如tbs、pbs、重金属盐溶液等，但实验证明，以0.01m枸橼酸盐缓冲液(ph6.[抗原修复修复方法切片抗原缓冲液]
用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片：1)抗原热修复 可根据实验室的具体条件，选用微波炉抗原修复、高压锅抗原修复或水浴高温抗原修复。抗原热修复可选用各种缓冲液，如tbs、pbs、重金属盐溶液等，但实验证明，以0.01m枸橼酸盐缓冲液(ph6.0)效果。请选用我公司提供的zli-9064 枸橼酸盐缓冲液(粉剂)配制，取该粉剂一包溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，其ph值在6.0 ± 0.1，如因蒸馏水本身造成的ph值偏差，请自行调整。
(1)高压热修复 切片脱蜡至水。将1500ml~3000ml的0.01m*缓冲溶液(ph6.0，工作液)或0.001medta(ph8.0)注入不锈钢压力锅中加热至沸腾。切片置于金属架上，放入锅内，使切片位于液面以下，盖锅压阀。当压力锅开始慢慢喷气时(约加热5~6分钟后)，计时1~2分钟，然后将压力锅端离热源，冷水冲至室温后，取下气阀，打开锅盖，取出切片，蒸馏水洗后，pbs洗2分钟×3，下接免疫组化染色步骤。
(2)煮沸热修复 切片脱蜡至水后，放入盛有0.01m*缓冲溶液(ph6.0，工作液)的容器中，并将此容器置于盛有一定数量自来水的大器皿中，电炉上加热煮沸，从小容器的温度到达92℃~98℃起开始计时15~20分钟，然后端离电炉，室温冷却20~30分钟，蒸馏水冲洗，pbs洗，
(3)微波热修复。切片脱蜡至水后，3%h2o2处理10分钟，蒸馏水洗2分钟×3。将切片放入盛有枸橼酸盐缓冲液(工作液)的容器中，置微波炉内加热使容器内液体温度保持在92℃~98℃之间并持续10~15分钟(注意：无论是使用医用或家用微波炉，请根据具体机型酌情设置条件，务必满足以上步骤中对温度和时间的要求)。取出容器，室温冷却10~20分钟(注意：不可将切片从缓冲液中取出冷却，以便使蛋白能够恢复原有的空间构型)。pbs洗，下接免疫组化染色步骤。
适用的抗原有：ar，bax，bcl-2，c-fos，x-jun，c-kit，c-myc，e-cadherin，chromogranin a，cyclin，er，heat shock protein，hpv，ki-67，mdmz，p53，p34，p16，p15，p-glycoprotein，pkc，pr，pcna，ras，rb，topoismeraseⅱ等。酶消化方法 常用0.1%*和0.4%*液。*使用前预热至37℃，切片也预热至37℃，消化时间约为5~30分钟(*的zui终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%至0.25%); *消化37℃时间为30分钟。皂素(saponin)：一般使用浓度为2~10mg/ml的saponin溶液，消化时间为室温孵育30分钟。 适用于被固定遮避的抗原，其中有：collagen，complement，cytokeratin，c-erb-2，gfap，lca，ln等。
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