4-香豆酸：辅酶A连接酶（4CL）活性检测试剂盒 （紫外分光光度法）
4-香豆酸：辅酶a连接酶（4cl）活性检测试剂盒
（紫外分光光度法）
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
产品货号：ba1005
产品规格：50管/48样
产品内容：
提取液：液体60ml×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体30ml×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入6ml蒸馏水溶解，可以分装后-20℃保存，避免反复冻融。
试剂三：液体6ml×1瓶，4℃保存；
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前用6ml蒸馏水溶解备用，可以分装后-20℃保存，避免反复冻融。
试剂五：粉剂×1支，4℃保存；加入1ml蒸馏水溶解。临用前用蒸馏水稀释40倍后备用，现用现配。
产品说明：
4-香豆酸：辅酶a连接酶（4-coumarate:coa ligase，4cl）是木质素生物合成的关键酶之一，主要催化肉桂酸及其羟基或者甲氧基衍生物生成相应的辅酶a酯，这些中间产物随后进入苯丙类衍生物支路合成途径。该酶主要存在于高等植物、酵母和菌类中，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量而提高其品质提供依据。
4cl催化4-香豆酸和 coa生成4-香豆酸coa，其在333nm 下测有特征吸收峰，测定4-香豆酸coa的生成速率，即可反映4cl活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1ml石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、ep管、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1 的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200w，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤：
1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至333nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：按体积比将试剂二：试剂三：试剂四：试剂五=1:1:1:1的比例配制工作液，现用现配。
3、操作表：在1.5mlep管中进行下列操作：
试剂名称（µl）
空白管
测定管
工作液
100
样本
100
蒸馏水
400
400
试剂一
500
500
充分混匀后测定333nm下的初始值a1，37℃反应30min后再次测定吸光值a2，计算△a测定管=a2 测定管-a1测定管，△a空白管= a2空白管-a1空白管，△a=△a测定管-△a空白管。
4cl 活性计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol 4-香豆酸辅酶a定义为一个酶活力单位。
4cl（u/mg prot）＝[∆a×v反总÷（ε×d）×109]÷(v样×cpr) ÷t=15.87×∆a÷cpr。
（2）按样本鲜重计算：
单位定义：每g组织每分钟生成1 nmol 4-香豆酸辅酶a定义为一个酶活力单位。
4cl（u/g 鲜重）＝[∆a×v反总÷（ε×d）×109]÷(w ×v样÷v样总) ÷t=15.87×∆a÷w。
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol 4-香豆酸辅酶a定义为一个酶活力单位。
4cl（u/104 cell）＝[∆a×v反总÷（ε×d）×109]÷(500×v样÷v样总) ÷t=0.03174×∆a。
v反总：反应体系总体积，1×10-3l；ε：4-香豆酸辅酶a摩尔消光系数，2.1×104l/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；v样：加入样本体积，0.1ml；v样总：加入提取液体积，1ml；t：反应时间，30min；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；w：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
注意事项：
1、若∆a大于0.5，将粗酶液用蒸馏水稀释后再进行测定。
2、建议一次测定不要测定过多样品以免耽误过多的酶促反应时间。
3、空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。
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提取液：液体60ml×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体30ml×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入6ml蒸馏水溶解，可以分装后-20℃保存，避免反复冻融。
试剂三：液体6ml×1瓶，4℃保存；
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前用6ml蒸馏水溶解备用，可以分装后-20℃保存，避免反复冻融。
试剂五：粉剂×1支，4℃保存；加入1ml蒸馏水溶解。临用前用蒸馏水稀释40倍后备用，现用现配。
产品说明：
4-香豆酸：辅酶a连接酶（4-coumarate:coa ligase，4cl）是木质素生物合成的关键酶之一，主要催化肉桂酸及其羟基或者甲氧基衍生物生成相应的辅酶a酯，这些中间产物随后进入苯丙类衍生物支路合成途径。该酶主要存在于高等植物、酵母和菌类中，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量而提高其品质提供依据。
4cl催化4-香豆酸和 coa生成4-香豆酸coa，其在333nm 下测有特征吸收峰，测定4-香豆酸coa的生成速率，即可反映4cl活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1ml石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、ep管、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1 的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200w，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤：
1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至333nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：按体积比将试剂二：试剂三：试剂四：试剂五=1:1:1:1的比例配制工作液，现用现配。
3、操作表：在1.5mlep管中进行下列操作：
试剂名称（µl）
空白管
测定管
工作液
100
样本
100
蒸馏水
400
400
试剂一
500
500
充分混匀后测定333nm下的初始值a1，37℃反应30min后再次测定吸光值a2，计算△a测定管=a2 测定管-a1测定管，△a空白管= a2空白管-a1空白管，△a=△a测定管-△a空白管。
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（1）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol 4-香豆酸辅酶a定义为一个酶活力单位。
4cl（u/mg prot）＝[∆a×v反总÷（ε×d）×109]÷(v样×cpr) ÷t=15.87×∆a÷cpr。
（2）按样本鲜重计算：
单位定义：每g组织每分钟生成1 nmol 4-香豆酸辅酶a定义为一个酶活力单位。
4cl（u/g 鲜重）＝[∆a×v反总÷（ε×d）×109]÷(w ×v样÷v样总) ÷t=15.87×∆a÷w。
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol 4-香豆酸辅酶a定义为一个酶活力单位。
4cl（u/104 cell）＝[∆a×v反总÷（ε×d）×109]÷(500×v样÷v样总) ÷t=0.03174×∆a。
v反总：反应体系总体积，1×10-3l；ε：4-香豆酸辅酶a摩尔消光系数，2.1×104l/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；v样：加入样本体积，0.1ml；v样总：加入提取液体积，1ml；t：反应时间，30min；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；w：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
注意事项：
1、若∆a大于0.5，将粗酶液用蒸馏水稀释后再进行测定。
2、建议一次测定不要测定过多样品以免耽误过多的酶促反应时间。
3、空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。
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石家庄盘石泵业-潜水电泵使用注意事项
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