茁彩生物ㅣ走进EdU系列荧光染色

细胞增殖、细胞周期、细胞毒性、dna复制及修复、信号通路等是测定dna合成情况研究方向的常用方法之一,用到的检测试剂主要是胸腺嘧啶核苷酸类似物(brdu、edu),两种试剂在检测方面有一些不同之处。
brdu免疫检测需要变性dna后才能与抗体结合,
edu因为其炔羟基团可以与一些荧光染料发生“click”化学反应,无需变形,从而将细胞标记上荧光,因此应用更广泛。
edu和brdu检测区别
brdu检测增殖细胞的特点及原理
brdu(5-bromodeoxyuridine)是一种假核苷酸,它被用来检测细胞增殖。它可以通过与正常dna碱基结合,从而替换掉正常dna。brdu在细胞分裂时被复制到dna中,并在细胞内存在一段时间,因此它可以用来指示哪些细胞正在增殖。
brdu检测的基本原理是:在细胞增殖过程中,brdu会被复制到dna中,并与dna碱基结合。这些dna含有brdu的细胞可以通过免疫组化或fish技术被检测出来。
brdu的检测可以用于研究细胞的生长和分裂,也可以用于检测癌症细胞的增殖和活动。例如,brdu可以用来检测肿瘤细胞中的dna损伤,以及化疗药物对肿瘤细胞的作用。
brdu也可以用于检测免疫系统中的细胞,例如检测t细胞增殖以及抗原激活的活性t细胞。此外,brdu也可以用来检测神经细胞的发育。
brdu检测是一种有效的检测细胞增殖的方法,它可以用来研究细胞的生长、分裂和发育,以及肿瘤细胞的活动和化疗药物的作用。
edu检测增殖细胞的特点及原理
edu(5‐ethynyl‐2′‐deoxyuridine,5‐乙炔基‐2′脱氧核苷)也是一种胸腺嘧啶核苷的类似物,其化学结构特点是脱氧胸腺嘧啶环上与5位c原子相连的甲基被乙炔基取代,在s期细胞增殖时可作为底物掺入到正在复制的dna链中,
edu在细胞增殖时能够插入正在复制的dna分子中,基于edu与染料的共轭反应可以有效地检测处于s期的细胞百分数。荧光染料可以同edu发生“click”化学反应(点击法),从而将增殖的细胞标记上荧光。可用于细胞成像、流式、细胞示踪、dna损伤修复检测、线粒体活性检测以及病毒增殖活性检测等,edu亦适用于活体注射,稳定,对活体没有副作用。
与传统的免疫荧光染色(brdu)检测方法相比,edu检测法更简单、更快速、更准确,不需要严格的样品变性(酸解、热解、酶解)处理,有效地避免了样品损伤,有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增殖的真实情况,具有更高的灵敏度和更快的检测速度。
edu和brdu检测区别见下表
edu
brdu
分子量大小
252.22 g·mol−1
307.098 g·mol⁻¹
标记检测方式
化学反应(点击法)
免疫反应
是否影响其他标记
不影响
影响
dna是否变性


标记检测时长
≤2.5 h
过夜
检测灵敏度

一般
edu检测的优点:
1、更简单:仅需edu孵育;无需抗原抗体反应,基于小分子化学反应的检测方法简单高效,反应仅需要几分钟;
2、更灵敏:无需抗体,检测染料仅brdu抗体的1/500,很容易扩散,即便是单个增殖细胞也能准确检测;
3、更快速:无需过夜,省却了抗原抗体反应的复杂繁琐步骤,只需2.5 h;
4、更准确:无需dna变性(酸解、热解、酶解等),可有效避免变性带来的样品损伤,确保细胞核边缘清晰完整;
5、更兼容:允许与多种抗体、荧光染料同时标记;对样品几乎无损伤,更容易与多种抗体或荧光蛋白同时标记,能够同时检测细胞其他性状特征;
6、应用性广,细胞成像、流式、细胞示踪、dna损伤修复检测、病毒增殖活性检测,适用于各种动物细胞检测,对植物细胞亦适用。

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