PI3K/Akt/mTOR信号通路
目的：通过特异性阻断pi3k和mtor，观察hepg2和hep3b细胞株pi3k/akt/mtor信号通路活性及生物学行为的改变，探讨相关的分子机制。
方法：在培养的hepg2、hep3b人肝癌细胞株和人正常肝细胞株qsg-7701上，以免疫印迹方法（western blot）检测各细胞株中pi3k（p110α亚单位）、pten、pakt（s473，t308）和p-mtor（s2448）的表达情况；分别用 pi3k抑制剂ly294002（50μmol/ml）和mtor抑制剂rapamycin（rapa，50 nmol/ml）孵育hepg2和hep3b细胞，以mtt比色法检测细胞的增殖能力，以流式细胞术（flow cytometry）检测细胞周期和凋亡情况，以western blot法检测细胞中pakt（s473，t308）和p-mtor（s2448）的表达改变。
结果：pten在hepg2和hep3b细胞中基本无表达，在qsg-7701细胞株中高表达，pakt和p-mtor在hepg2和hep3b细胞中的 表达较qsg-7701细胞均显著升高；ly294002和rapa均呈剂量-时间依赖的抑制hepg2和hep3b细胞生长。饱和效应浓度的 ly294002和rapa作用24小时后，hepg2和hep3b细胞均呈现明显的g0/g1期阻滞，处于s期的细胞比例较对照组显著减少 （p<0.01）；两给药组中hepg2细胞和hep3b细胞的凋亡率与对照组比较均显著增加（p<0.01）；两给药组hepg2细胞的凋 亡率显著高于hep3b细胞（p<0.01或p<0.05），并且hepg2细胞的凋亡率在rapa给药组显著高于ly294002给药组 （p<0.01），但hep3b细胞的凋亡率在两组间无显著差异。饱和效应浓度的ly294002作用48小时后，hepg2和hep3b细胞中 pakt（t308，s473）和p-mtor（s2448）的表达水平较对照组均显著降低（p<0.01），饱和效应浓度的rapa作用48小时 后，hepg2和hep3b细胞中p-mtor（s2448）的表达水平较对照组均显著降低（p<0.01），而pakt（t308，s473）的 表达水平较对照组均显著升高（分别p<0.01）。
结论：（1）hepg2和hep3b细胞存在pi3k/akt/mtor信号通路的组成性激活；（2）ly294002和rapa能有效阻断hepg2和 hep3b细胞pi3k/akt/mtor信号通路，抑制hcc细胞的生长增殖，诱导细胞周期阻滞，促进细胞凋亡，且阻断效应与hcc细胞p53的表达有 关；（3）一定浓度范围内，hepg2细胞对阻断剂的敏感性高于hep3b细胞，rapa对pi3k/akt /mtor信号通路的部分阻断效应优于ly294002。
目的：观察*（doxorubicin，dox）单用或与rapa联合用药对hepg2和hep3b细胞生物学行为及活性的影响，探讨mtor抑制剂增强hcc*药物疗效的相关作用机制。
方法：分别取对数生*的hepg2和hep3b细胞，以不同浓度的dox单用或与rapa（20 nmol/ml）联合应用培养48h或24h，以mtt法测定药物对hepg2和hep3b细胞的增殖抑制作用，以流式细胞技术检测二者的凋亡情况，以 western blot法检测者p-p70s6k（t389）、p-4e-bp1（s65）和ps6（s235/236）的表达改变。
结果：0.156～2.5 mg/l浓度范围内，dox能抑制hepg2和hep3b细胞的增殖，且呈浓度依赖性；dox在0.625～10mg/l浓度范围内，hep3b细胞的相 对存活率显著大于hepg2细胞（p<0.01）；与dox单用比较，dox（0.156～2.5mg/l）与rapa联用显著降低了hepg2和 hep3b细胞的存活率（p<0.01或p<0.05），dox（0.156～10mg/l）与rapa联用，hep3b细胞存活率显著大于 hepg2细胞（p<0.01）。dox（0.156～10mg/l）单用或与rapa联用24h均可诱导hepg2和hep3b细胞凋亡发生，且 随dox浓度增加，凋亡牢升高；与dox单用比较，dox（1.25～10mg/l）与rapa联用，hepg2细胞捌亡率较显著升高 （p<0.01或p<0.05），dox（2.5～10 mg/l）与rapa联用，hep3b细胞凋亡率显著升高（分别p<0.05）；dox（5.0～10mg/l）单用，hepg2细胞凋亡率显著大 于hep3b细胞（分别p<0.05），dox（2.5～10 mg/l）与rapa联用，hepg2细胞凋亡率显著大于hep3b细胞（分别p<0.01）。rapa（20nmol/l）、dox（2.5mg /l）以及二者联用均可导致hepg2或hep3b细胞p-p70s6k（t389）、p-4e-bp1（s65）和ps6（s235/236）表达减 少，且以dox与rapa联用效应zui为明显。
结论：（1）dox可抑制hepg2和hep3b细胞生长增殖，促进细胞凋亡，下调的活化程度；（2）dox与 rapa联合用药能显著抑制hepg2和hep3b细胞的增殖，促进细胞凋亡，下调的活化程度，并在一定浓度范围内表 现出协同效应；（3）在一定浓度范围内，hepg2细胞对dox单用或与rapa联合用药的敏感性显著高于hep3b细胞，可能与hcc细胞p53的表达 差异有关。
目的：分析人hcc组织中的活化水平与p53的表达及hcc临床病理参数之间的关系，评估在hcc诊断和预后评价中的作用。
方法：76例hcc组织样本经临床病理分期分级后，以免疫组织化学方法检测hcc组织和癌旁组织中p53、pakt、pten、p-mtor和ps6的表达情况，分析上述指标在不同hcc病理特征条件下的阳性表达率，并与正常肝组织比较。
结果：p53、pakt、pten、p-mtor和ps6在人hcc组织有不同程度的表达，hcc组织p53（60.5％，46/76）、 pakt（92.1％，70/76）、p-mtor（84.2％，64/76）和ps6（88.2％，67/76）的阳性表达比例较癌旁肝组织（分别为 10.5％，8/76、63.2％，48/76、46.1％，35/76、52.6％，40/76）和正常肝组织（分别为0％、55.0％，11/20、 50.0％，10/20、45.0％，9/20）显著升高（p<0.01），而pten（65.8％，50/76）的阳性表达比例较癌旁肝组织 （89.5％，68/76）和正常肝组织（85.0％，17/20）显著减少（p<0.05）；p53阳性表达hcc组织pakt、p-mtor和 ps6的阳性表达率较p53阴性表达组织显著升高（p<0.01），而pten的阳性表达率较p53阴性表达组织显著降低（p＜0.01）。低分 化、存在血管侵袭、tnm分期高的hcc组织p53、pakt、p-mtor和ps6的阳性表达率较相对应的分化较好、无血管侵袭、tnm分期低的hcc 组织显著升高（分别p<0.01或p<0.05）；而pten的阳性表达率显著降低（分别p<0.01或p<0.05）。
结论：（1）人hcc组织存在的激活；（2）人hcc组织的活化程度与p53的表 达可能有相关性；（3）人hcc组织的活化程度与hcc的临床病理特征有关，活化程度越高的hcc其分化程度越低、血管侵袭多发、tnm分期高。
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结果：pten在hepg2和hep3b细胞中基本无表达，在qsg-7701细胞株中高表达，pakt和p-mtor在hepg2和hep3b细胞中的 表达较qsg-7701细胞均显著升高；ly294002和rapa均呈剂量-时间依赖的抑制hepg2和hep3b细胞生长。饱和效应浓度的 ly294002和rapa作用24小时后，hepg2和hep3b细胞均呈现明显的g0/g1期阻滞，处于s期的细胞比例较对照组显著减少 （p<0.01）；两给药组中hepg2细胞和hep3b细胞的凋亡率与对照组比较均显著增加（p<0.01）；两给药组hepg2细胞的凋 亡率显著高于hep3b细胞（p<0.01或p<0.05），并且hepg2细胞的凋亡率在rapa给药组显著高于ly294002给药组 （p<0.01），但hep3b细胞的凋亡率在两组间无显著差异。饱和效应浓度的ly294002作用48小时后，hepg2和hep3b细胞中 pakt（t308，s473）和p-mtor（s2448）的表达水平较对照组均显著降低（p<0.01），饱和效应浓度的rapa作用48小时 后，hepg2和hep3b细胞中p-mtor（s2448）的表达水平较对照组均显著降低（p<0.01），而pakt（t308，s473）的 表达水平较对照组均显著升高（分别p<0.01）。
结论：（1）hepg2和hep3b细胞存在pi3k/akt/mtor信号通路的组成性激活；（2）ly294002和rapa能有效阻断hepg2和 hep3b细胞pi3k/akt/mtor信号通路，抑制hcc细胞的生长增殖，诱导细胞周期阻滞，促进细胞凋亡，且阻断效应与hcc细胞p53的表达有 关；（3）一定浓度范围内，hepg2细胞对阻断剂的敏感性高于hep3b细胞，rapa对pi3k/akt /mtor信号通路的部分阻断效应优于ly294002。
目的：观察*（doxorubicin，dox）单用或与rapa联合用药对hepg2和hep3b细胞生物学行为及活性的影响，探讨mtor抑制剂增强hcc*药物疗效的相关作用机制。
方法：分别取对数生*的hepg2和hep3b细胞，以不同浓度的dox单用或与rapa（20 nmol/ml）联合应用培养48h或24h，以mtt法测定药物对hepg2和hep3b细胞的增殖抑制作用，以流式细胞技术检测二者的凋亡情况，以 western blot法检测者p-p70s6k（t389）、p-4e-bp1（s65）和ps6（s235/236）的表达改变。
结果：0.156～2.5 mg/l浓度范围内，dox能抑制hepg2和hep3b细胞的增殖，且呈浓度依赖性；dox在0.625～10mg/l浓度范围内，hep3b细胞的相 对存活率显著大于hepg2细胞（p<0.01）；与dox单用比较，dox（0.156～2.5mg/l）与rapa联用显著降低了hepg2和 hep3b细胞的存活率（p<0.01或p<0.05），dox（0.156～10mg/l）与rapa联用，hep3b细胞存活率显著大于 hepg2细胞（p<0.01）。dox（0.156～10mg/l）单用或与rapa联用24h均可诱导hepg2和hep3b细胞凋亡发生，且 随dox浓度增加，凋亡牢升高；与dox单用比较，dox（1.25～10mg/l）与rapa联用，hepg2细胞捌亡率较显著升高 （p<0.01或p<0.05），dox（2.5～10 mg/l）与rapa联用，hep3b细胞凋亡率显著升高（分别p<0.05）；dox（5.0～10mg/l）单用，hepg2细胞凋亡率显著大 于hep3b细胞（分别p<0.05），dox（2.5～10 mg/l）与rapa联用，hepg2细胞凋亡率显著大于hep3b细胞（分别p<0.01）。rapa（20nmol/l）、dox（2.5mg /l）以及二者联用均可导致hepg2或hep3b细胞p-p70s6k（t389）、p-4e-bp1（s65）和ps6（s235/236）表达减 少，且以dox与rapa联用效应zui为明显。
结论：（1）dox可抑制hepg2和hep3b细胞生长增殖，促进细胞凋亡，下调的活化程度；（2）dox与 rapa联合用药能显著抑制hepg2和hep3b细胞的增殖，促进细胞凋亡，下调的活化程度，并在一定浓度范围内表 现出协同效应；（3）在一定浓度范围内，hepg2细胞对dox单用或与rapa联合用药的敏感性显著高于hep3b细胞，可能与hcc细胞p53的表达 差异有关。
目的：分析人hcc组织中的活化水平与p53的表达及hcc临床病理参数之间的关系，评估在hcc诊断和预后评价中的作用。
方法：76例hcc组织样本经临床病理分期分级后，以免疫组织化学方法检测hcc组织和癌旁组织中p53、pakt、pten、p-mtor和ps6的表达情况，分析上述指标在不同hcc病理特征条件下的阳性表达率，并与正常肝组织比较。
结果：p53、pakt、pten、p-mtor和ps6在人hcc组织有不同程度的表达，hcc组织p53（60.5％，46/76）、 pakt（92.1％，70/76）、p-mtor（84.2％，64/76）和ps6（88.2％，67/76）的阳性表达比例较癌旁肝组织（分别为 10.5％，8/76、63.2％，48/76、46.1％，35/76、52.6％，40/76）和正常肝组织（分别为0％、55.0％，11/20、 50.0％，10/20、45.0％，9/20）显著升高（p<0.01），而pten（65.8％，50/76）的阳性表达比例较癌旁肝组织 （89.5％，68/76）和正常肝组织（85.0％，17/20）显著减少（p<0.05）；p53阳性表达hcc组织pakt、p-mtor和 ps6的阳性表达率较p53阴性表达组织显著升高（p<0.01），而pten的阳性表达率较p53阴性表达组织显著降低（p＜0.01）。低分 化、存在血管侵袭、tnm分期高的hcc组织p53、pakt、p-mtor和ps6的阳性表达率较相对应的分化较好、无血管侵袭、tnm分期低的hcc 组织显著升高（分别p<0.01或p<0.05）；而pten的阳性表达率显著降低（分别p<0.01或p<0.05）。
结论：（1）人hcc组织存在的激活；（2）人hcc组织的活化程度与p53的表 达可能有相关性；（3）人hcc组织的活化程度与hcc的临床病理特征有关，活化程度越高的hcc其分化程度越低、血管侵袭多发、tnm分期高。
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