Zeta Life 转染试剂解决RAW264.7细胞转染效率低的问题
raw264.7细胞转染效率低怎样提高转染效率一直是困扰实验者的一道难题，特别对于比较大的质粒dna的转染更是困难；我们实验室用美国zeta life公司advanced dna rna转染试剂货号ad600150转染raw 264.7细胞整理了一套优化方案希望对大家转染raw 264.7细胞提高转染效率有一定的帮助。
下图是用美国zeta life公司advanced dna rna转染试剂货号ad600150在6孔板转染8000bp左右的pegfp-c1r到raw264.7细胞的荧光和细胞明场图片。
提高转染raw 264.7细胞条件如下
一、质粒dna准备
1、质粒dna浓度700ng/ul（注意：①溶解于无菌双蒸水或超纯水；②无内毒素），我用qiagen试剂盒除去的内毒素
二、操作流程
1、先将细胞接种到细胞培养板，细胞汇合度在70%左右，再进行转染。
2、复合物制备：将质粒dna与zeta life公司advanced dna rna货号ad600150转染试剂按照1:1（12ug:12ul）关系直接混合，用移液器吹吸10-15次混匀，室温静止10-15分钟。
3、将复合物加入*培养基的细胞培养板，并轻轻混匀，放入培养箱中继续培养（不建议把复合物加入到无血清的培养基里面，我后期会进一步摸索此条件）。
4、转染24小时后对细胞进行正常换液。
5、质粒dna转染48小时后荧光检测转染效率
三、注意事项：
1本转染方法不适用在下面转染试剂的转染如：lipo3000、,fugene 6、fugene hd、effectene等；
2细胞培养zeta life z7181-500胎牛血清，gibco的dmem;
四、美国zeta life公司advanced dna rna转染试剂信息：
产品名称
货号
规格
数量
报价
advanced dna rna 转染试剂
ad600025
0.25ml
1
1590
advanced dna rna 转染试剂
ad600050
0.5
1
2390
advanced dna rna 转染试剂
ad600075
0.75
1
2890
advanced dna rna 转染试剂
ad600150
1.5ml
1
4490
advanced dna rna 转染试剂
ad600500
5ml
1
电询
advanced dna rna 转染试剂
ad601000
10ml
1
电询
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1、质粒dna浓度700ng/ul（注意：①溶解于无菌双蒸水或超纯水；②无内毒素），我用qiagen试剂盒除去的内毒素
二、操作流程
1、先将细胞接种到细胞培养板，细胞汇合度在70%左右，再进行转染。
2、复合物制备：将质粒dna与zeta life公司advanced dna rna货号ad600150转染试剂按照1:1（12ug:12ul）关系直接混合，用移液器吹吸10-15次混匀，室温静止10-15分钟。
3、将复合物加入*培养基的细胞培养板，并轻轻混匀，放入培养箱中继续培养（不建议把复合物加入到无血清的培养基里面，我后期会进一步摸索此条件）。
4、转染24小时后对细胞进行正常换液。
5、质粒dna转染48小时后荧光检测转染效率
三、注意事项：
1本转染方法不适用在下面转染试剂的转染如：lipo3000、,fugene 6、fugene hd、effectene等；
2细胞培养zeta life z7181-500胎牛血清，gibco的dmem;
四、美国zeta life公司advanced dna rna转染试剂信息：
产品名称
货号
规格
数量
报价
advanced dna rna 转染试剂
ad600025
0.25ml
1
1590
advanced dna rna 转染试剂
ad600050
0.5
1
2390
advanced dna rna 转染试剂
ad600075
0.75
1
2890
advanced dna rna 转染试剂
ad600150
1.5ml
1
4490
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ad600500
5ml
1
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