GUS染色液的染色步骤说明
gus染色液用于生物化学活性分析、免疫分析以及组织和细胞的组织化学染色,多用于转基因植物的gus基因表达。gus染色液是适宜的反应条件下,β-葡萄糖苷酶(gus)可将x-gluc水解成蓝色物质,该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝物质,具有gus活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点,可用肉眼或显微镜观察到。
gus染色步骤：
1.预处理：将叶片、花瓣、根茎等组织剪成小片，放于1.5ml离心管中，加入预冷的90%丙酮覆盖材料，常温处理20-30分钟。此步骤可以预固定组织并且可以去除部分叶绿素。
注：用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。例如，拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片(1-3mm)。当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物渗入细胞。
2.染色：用蒸馏水将材料漂洗干净后置于1.5ml离心管中；加入适量配制好的gus染色工作液覆盖材料；锡箔纸包好常温过夜放置。
3.洗脱：用25%, 50% 70%, 95%乙醇梯度洗脱，摇床轻摇每次20分钟。
4.观察：肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为gus表达位点。
当操作大的组织和样品时可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞。
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