薄层色谱法的操作方法

薄层色谱法是用于分离混合物的层析技术,利用覆盖了很薄一层吸附剂的玻璃板、塑料片或铝箔上进行混合物的分离。薄层色谱法操作简单,是一种常用的色谱分离方法,下面就简单介绍一下薄层色谱法的操作方法
1.薄层板:
有市售薄层板(普通或高效板)和自制薄层板,可根据需要选用。
2.点样:
通常在洁净干燥的环境,用毛细管或配合相应的半自动或自动点样器械将样品点样于薄层板上。一般为圆点状或窄细的条带状,点样基线距底边10-15mm,高效板一般基线距底边8-10mm。圆点状直径一般不大3mm,高效板一般不大于2mm。接触点样时注意勿损伤薄层板表面。条带状宽度一般为5-i0mm,高效板条带宽度一般为 4-8mm,可用半自动或自动点样器械喷雾法点样。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不干扰为宜,一般不少于8mm,高效板供试品间隔不少于5mm。
3.展开
将点好供试品的薄层板放入展开缸中,浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜,密闭。除另有规定外,一般上行展开8-15cm,高效薄层板上行展开5 -8cm。溶剂前沿达到规定的展距,取出薄层板,晾干,待检测。
4.显色与检视
试品含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下检视,也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色或加热显色,在日光下检视。有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在365nm紫外光灯下观察荧光色谱。对于可见光下无色,但在紫外光下有吸收的成分可用带有荧光剂的硅胶板,在254nm紫外光灯下观察荧光板面上的荧光猝灭物质形成的色谱。
5.记录
薄层色谱图像一般可采用摄像设备拍摄,以光学照片或电子图像的形式保存。也可用薄层扫描仪扫描记录相应的色谱图。

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