血清,指血液凝结后,在血浆中除掉纤维蛋白原别离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除掉的血浆。其主要效果是供给基本营养物质、供给激素和各种成长因子、供给结合蛋白、供给促触摸和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些维护效果。
血清的保存应该注意以下几点:
(1)热灭活是指56℃, 30分钟加热已*冻结的血清.加热过程中须规矩摇晃均匀.此热处理的意图是使血清中的补体成分(complement)灭活.除非有必要,一般不建议作此热处理,因为热处理会形成血清沉积物明显增多,而且还会影响血清的质量.补体参加反应有:细胞毒效果, 平滑肌细胞缩短, 肥大细胞和血小板开释组胺, 增强吞噬效果, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化.
(2)需求*保存的血清有必要贮存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中.4℃冰箱中保存时间切勿超越1个月.因为血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,有必要预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂
(3)瓶装血清冻结需采用逐步冻结法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装.在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿形成气泡),使温度与成分均一,减少沉积的发生.切勿直接将血清从-20℃进入37℃冻结,这样因温度改动太大,容易形成蛋白质凝集而呈现沉积.
(4)一般厂商供给的血清为无菌,无需再过滤除菌.如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一同过滤,切勿直接过滤血清.
(5)血清中的沉积物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及冻结后血清中纤维蛋白形成,这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm, 5分钟去除,也可不用处理. 显微镜下小黑点:通过热处理过的血清,沉积物的形成会明显增多.有些沉积物在显微镜下调查象小黑点,常误认为血清受污染.一般情况下,此小黑点不会影响细胞成长,但假如怀疑血清质量,则应立即停止使用,替换另一批号的血清.
(6)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得污浊,一起血清中的有效成分会损坏而影响血清质量.
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