改善对 37 种脂肪酸甲酯的分析--安捷伦气相色谱
前言： 脂肪在食品营养与食品化学领域的研究中发挥着重要作用。脂 肪由复杂的脂肪酸混合物组成，包括饱和、单不饱和以及多不 饱和的各种碳链长度的化合物。由于脂肪酸在体内的作用取决 于结构的不同，因此有必要对食品中含有的脂肪酸进行详细的 组成分析。测定食品中的总脂肪与反式脂肪含量时，对脂肪酸 及其甲酯衍生物 (fame) 的气相色谱分析是脂肪表征的重要工 具1,2。不同的固定相以及其他色谱柱规格（如色谱柱长度、内 径和膜厚）的选择主要取决于脂肪酸组成的复杂性与分离的具 体要求。 常规情况下，使用聚乙二醇 (peg) 型毛细管柱对海洋鱼油和肉 类样品进行 fame 分析，包括测定乳脂中的丁酸。这是因为 peg 毛细管柱能够根据碳链长度和不饱和度分别洗脱 fame 异构体。而据报道，peg 色谱柱有一个严重局限，就是无法 实现顺式-反式的分离。所有的顺反异构体均会发生共洗脱3 。
许多常规的食品检测方法中，在使用 gc/fid 测定脂肪酸组成 时都要求对特定的顺反脂肪酸异构体进行分离。分析食用油等 更复杂的样品时，使用涂覆氰丙基固定相的毛细管柱能够获 得出色的分离度。具有中等含量氰丙基固定相的 agilent j&w db-fastfame 色谱柱能够实现复杂 fame 混合物的快速出色 分离以及某些顺反异构体的分离。如果需要实现更精细的顺 反分离，强极性的氰丙基聚硅氧烷型色谱柱（cp-sil 88 fame 分析柱/hp-88 柱）。而在氰丙基聚硅氧烷固定相 上，一些碳链长度经常重叠，引起峰识别问题。因此需要较长 的气相色谱柱（如 100m）和较长的分析时间来实现良好分 离，但这又会导致效率低下。
37 组分 fame 混标专门为模拟多种食品样品的脂肪酸组成而 设计，可用于鉴定多种食品中的关键脂肪酸甲酯 (fame)。该 混标中包含 c4:0 至 c24:1 范围的 fame，包括多数重要的饱 和、单不饱和多不饱和 fame（表 1）。 本应用简报介绍了使用以下三种类型 fame 分析毛细 管柱对 37 组分 fame 混合物进行分析：agilent j&w cp-sil 88 fame 分析柱、db-fastfame 柱和 agilent j&w db-fatwax 超高惰性气相色谱柱。
实验部分 ：试剂与标准品 37 组分 fame 混标（部件号 cdaa-252795-mix-1 ml）购自 上海安谱科学仪器有限公司。表 1 列出了混合物中每种组分 的浓度。 pufa（来自海洋）、pufa no.2（来自动物）和 pufa no.3（来自鲱鱼油）购自深圳市明博林生物科技有限公司。 混合物为 100 mg 净混合物，分别用丙酮稀释 100 倍。 仪器 使用配备火焰离子化检测器 (fid) 的 agilent 7890b 气相色谱 仪进行分析。使用配备 5 µl 进样针（部件号 g4513-80213） 和分流/不分流进样口的 agilent 7683b 自动液体进样器进样。 仪器配置与分析条件总结于表 2（cp-sil 88 fame 柱）、 表 3（db-fastfame 色谱柱）、表 4（高效 db-fastfame 色谱 柱）和表 5（db-fatwax ui 色谱柱）。表 6 列出了本研究中 使用的其他备件。
结果与讨论： 强极性氰丙基聚硅氧烷固定相（如 cp-sil 88 fame 柱或 hp-88 柱），是专门以改善顺反式 fame 分离为目的进行设计 的。之前的研究中成功地证明了强极性氰丙基聚硅氧烷色谱柱 对反式脂肪酸的测定效果。然而，很多应用中 37 组分 fame 分析的洗脱图案都出现显著的碳链重叠，例如，c18:3n6、 c18:3n3 和 c20:0；c20:3n3、c22:1n9 和 c20:4n63 。这会导 致峰的识别出现问题。图 1 显示使用 cp-sil 88 fame 分析专 用柱和 gc-fid 以优化方法分离 37 组分 fame 参比标样获得 了优异的选择性；所有 37 个组分均在一次运行中达到基线 分离。 为了使 37 组分 fame 混标中的所有化合物都获得良好的分离 度，实验中选择了 100 m 的 cp-sil 88 fame 分析气相色 谱柱，并将分析时间延长至 70 分钟以上。
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37 组分 fame 混标专门为模拟多种食品样品的脂肪酸组成而 设计，可用于鉴定多种食品中的关键脂肪酸甲酯 (fame)。该 混标中包含 c4:0 至 c24:1 范围的 fame，包括多数重要的饱 和、单不饱和多不饱和 fame（表 1）。 本应用简报介绍了使用以下三种类型 fame 分析毛细 管柱对 37 组分 fame 混合物进行分析：agilent j&w cp-sil 88 fame 分析柱、db-fastfame 柱和 agilent j&w db-fatwax 超高惰性气相色谱柱。
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结果与讨论： 强极性氰丙基聚硅氧烷固定相（如 cp-sil 88 fame 柱或 hp-88 柱），是专门以改善顺反式 fame 分离为目的进行设计 的。之前的研究中成功地证明了强极性氰丙基聚硅氧烷色谱柱 对反式脂肪酸的测定效果。然而，很多应用中 37 组分 fame 分析的洗脱图案都出现显著的碳链重叠，例如，c18:3n6、 c18:3n3 和 c20:0；c20:3n3、c22:1n9 和 c20:4n63 。这会导 致峰的识别出现问题。图 1 显示使用 cp-sil 88 fame 分析专 用柱和 gc-fid 以优化方法分离 37 组分 fame 参比标样获得 了优异的选择性；所有 37 个组分均在一次运行中达到基线 分离。 为了使 37 组分 fame 混标中的所有化合物都获得良好的分离 度，实验中选择了 100 m 的 cp-sil 88 fame 分析气相色 谱柱，并将分析时间延长至 70 分钟以上。
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