检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(elisa)。往预先包被小鼠转化生长因子(tgf)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、hrp标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物tmb显色,tmb在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠转化生长因子(tgf)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(od 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:edta、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
酶标仪(450nm)高精度加样器及枪头:0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul37℃恒温箱操作注意事项
试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶*溶解后再使用。实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。预处理后的样本无需稀释,直接取10μl加样即可。严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成
名称
96孔配置
48孔配置
备注
微孔酶标板
12孔×8条
12孔×4条
无
标准品
0.3ml
0.3ml
无
*
6ml
3ml
无
检测抗体-hrp
10ml
5ml
无
20×洗涤缓冲液
25ml
15ml
按说明书进行稀释
底物a
6ml
3ml
无
底物b
6ml
3ml
无
终止液
6ml
3ml
无
封板膜
2张
2张
无
说明书
1份
1份
无
自封袋
1个
1个
无
注:标准品浓度依次为:8000、4000、2000、1000、500、0 pg/ml.
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。自动洗板机:每孔注入洗液350μl,浸泡1min,洗板5次。操作步骤
从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μl;待测样本孔先加待测样本10μl,再加*40μl;随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(hrp)标记的检测抗体100μl,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。每孔加入底物a、b各50μl,37℃避光孵育15min。每孔加入终止液50μl,15min内,在450nm波长处测定各孔的od值。结果判断
绘制标准曲线:在excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应od值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数r值,大于等于0.9900。灵敏度:低检测浓度小于10pg/ml。特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。重复性:板内变异系数小于10%、板间变异系数小于15%。贮藏:2-8℃,避光防潮保存。有效期:6个月免责声明
试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。
进口高压气瓶减压器对比国产减压阀的优势
如何包装易碎易变形的食品?——外抽真空包装机
微波水热合成仪的方式运用
电器微机继电保护测试的广泛应用-赫兹电力
二手旋转精馏机(超重力精馏)
小鼠转化生长因子(TGF)ELISA检测试剂盒
一体化污水处理设备的保养
在UPLC-MS对肉中兽药多残留分析之前采用HLB小柱进行有效净化
钻孔产生的偏斜度如何控制?
威卡压力表在选购时我们需要注意的有哪些
西门子模块6ES7-321-1BLOO-OAAO原装*
光栅尺数显表 带继电器 实时显示 机床数显表
高频红外碳硫分析仪外观及功能要求
关于磁力泵的基本常识及自吸磁力泵的优点介绍
真空机组循环水冷却装置工作原理
MFH-5-1/4-L-S-B-EX费斯托电磁阀现货供应
闪点多少属于危化品?
海尔“无尾厨电”*改写行业格局
沥青低温延伸仪使用说明书
自动钻孔机的热熔钻头实际操作有哪些?