GB 29687-2013水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定
中华人民共和国国家标准
gb 29687-2013
食品安全国家标准
水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定高效液相色谱法
1范围
本标准规定了水产品中阿苯达唑及代谢物(2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜)残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。
本标准适用于水产品中阿苯达唑及代谢物(2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜)残留量的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可（ke）少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
gb/t 6682分析实验室用水规格和试验方法
sc/t 3016水产品抽样方法
3原理
试料中残留的阿苯达唑及代谢物，用乙酸乙酯提取，正己烷除脂，乙酸乙酯反萃取，高效液相色谱荧光检测器测定，外标法定量。
4试剂和材料
以下所用试剂，除特别注明外均为分析纯试剂，水为符合gb/t 6682规定的一级水。
4.1盐酸2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和阿苯达唑对照品：含量≥99%。
4.2正己烷：色谱纯。
4.3乙腈：色谱纯。
4.4甲醇：色谱纯。
4.5乙酸乙酯：色谱纯。
4.6二氯甲烷：色谱纯。
4.7磷酸。
4.8十二水磷酸氢二钠。
4.9庚烷磺酸钠：色谱纯。
4.10乙酸铵。
4.11 20%甲醇溶液：取甲醇80 ml，用水溶解并稀释至100 ml。
4.12 0.05 mol/l乙酸铵溶液：取乙酸铵3.85 g，用水溶解并稀释至1 000 ml。
4.13 0.04mol/l庚烷磺酸钠-磷酸溶液：取磷酸2.7ml，加水混匀，加庚烷磺酸钠8.08g，用水溶解并稀释至1 000 ml。
4.14 3%磷酸溶液：取磷酸1.75 ml，用水溶解并稀释至100 ml。
4.15 0.02 mol/l磷酸氢二钠溶液：取磷酸氢二钠0.716 g，用水溶解并稀释至100 ml，用3%磷酸溶液调节ph至8.5，现配现用。
4.16 100μg/ml阿苯达唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和2-氨基阿苯达唑砜标准贮备液：精密称取阿苯达唑、阿苯达唑砜和阿苯达唑亚砜各10mg以及盐酸2氨基阿苯达唑砜11.5mg，分别于100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为100μg/ml的标准贮备液。-18℃以下避光保存，有效期3个月。
4.17混合标准工作液：分别精密量取100μg/ml 2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和阿苯达唑标准储备液适量，于同一量瓶中，用80%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，配制成浓度分别为2-氨基阿苯达唑砜1.0μg/ml、阿苯达唑亚砜2.0μg/ ml、阿苯达唑砜0.2μg/ml以及阿苯达唑5.0μg/ml的混合标准工作液。2℃~8℃避光保存，有效期1个月。
5仪器与设备
5.1高效液相色谱仪：配荧光检测器。
5.2分析天平：感量0.000 01 g。
5.3天平：感量0.01 g。
5.4均质机。
5.5离心机。
5.6旋转蒸发器。
5.7氮吹仪。
5.8梨形瓶：100 ml。
5.9滤膜：有机相，0.45μm。
6试料的制备与保存
6.1试料的制备
取适量新鲜或冷冻的鱼，去鳞、去皮，沿脊背取肌肉；虾，去头、去壳，取肌肉部分。绞碎，并使均质。
——取均质后的供试样品，作为供试试料。
——取均质后的空白样品，作为空白试料。
——取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。
6.2试料的保存
-20℃以下保存。
7测定步骤
7.1虾、蟹类
7.1.1提取
称取试料2 g±0.02 g，于50 ml离心管中，加乙酸乙酯15 ml，均质30 s，振荡5 min，4 000 r/ min离心10 min，取上清液于100 ml梨形瓶中，残渣备用。另取一50 ml离心管，加乙酸乙酯15 ml，清洗均质机30 s，洗涤液于残渣中，振荡5 min，4 000 r/min离心10 min，上清液合并至100 ml梨形瓶中，于35℃旋转蒸发至干，用20%甲醇溶液1.0 ml溶解残渣。
7.1.2除脂
将上述溶液移入10 ml离心管中，再向梨形瓶中加入正己烷1 ml，洗涤，正己烷转入离心管中，振荡1 min，4 000 r/min离心5 min，弃正己烷层液，再加入正己烷1 ml，重复操作两次，取下层液备用。
7.1.3净化
备用液中加0.04 mol/l磷酸1 ml，混匀，加二氯甲烷1.5 ml，混合1 min，4 000 r/ min离心5 min，取二氯甲烷液于10ml离心管中，再加二氯甲烷1.5ml，重复提取两次，合并三次二氯甲烷液于10ml离心管中，于35℃氮气吹千；用0.02 mol/l磷酸氢二钠溶液1.0 ml溶解残余物，加乙酸乙酯2 ml，混合1min，4000r/min离心5min，将乙酸乙酯液移入另一10ml离心管中，再向磷酸氢二钠溶液中加乙酸乙酯2 ml，重复提取两次，合并三次乙酸乙酯液，于40℃氮气吹干，用20%甲醇-水1.0 ml溶解残留物，滤膜过滤，供液相色谱测定。
7.1.4基质匹配标准溶液的制备
称取5份空白试料2g±0.02g，于50ml离心管中，分别加入混合标准工作液0、10、25、100和200μl，混匀，按提取、除脂、净化步骤操作，基质标准溶液浓度分别为：2-氨基阿苯达唑砜0、0.01、0.025、0.1和0.2μg/ml，阿苯达唑亚砜0、0.02、0.05、0.2和0.4μg/ml，阿苯达唑砜0、0.002、0.005、0.02和0.04μg/ml，阿苯达唑0、0.05、0.125、0.5和1μg/ml，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.2鱼类
7.2.1提取
称取试料2 g±0.02 g，于50 ml离心管中，加乙酸乙酯15 ml，均质30 s，振荡提取5 min，4 000 r/min离心10 min，取上清液于100 ml梨形瓶中，残渣备用。另取一50 ml离心管加乙酸乙酯15ml，清洗均质机30s，将此液倒入上述残渣中振荡提取5min，4000r/min离心10min，上清液合并至100 ml梨形瓶中，于35℃减压旋转蒸发至千，加入20%甲醇溶液1.0 ml溶解残渣。
7.2.2除脂
将上述溶液移入10 ml离心管中，再向梨形瓶中加入正己烷1 ml，洗涤，正己烷转入离心管，振荡1 min，4 000 r/min离心5 min，去除正己烷层，再加入正己烷1 ml，依法重复操作两次。下层溶液过0.45μm有机相滤膜，供液相色谱测定。
7.2.3混合基质标准溶液的制备
称取5份空白试料2g±0.02g，于50ml离心管中，分别加混合标准工作液10、25、100和200μl，混匀按提取、除脂步骤操作，基质标准溶液浓度分别为：2-氨基阿苯达唑砜0、0.01、0.025、0.1和0.2μg/ml，阿苯达唑亚砜0、0.02、0.05、0.2和0.4μg/ml，阿苯达唑砜0、0.002、0.005、0.02和0.04μg/ml，阿苯达唑0、0.05、0.125、0.5和1μg/ ml，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.3测定
7.3.1色谱条件
7.3.1.1色谱柱：c18(150 mm×4.6 mm，粒径5μm )，或相当者。
7.3.1.2检测波长：激发波长：290 nm，发射波长：320 nm。
7.3.1.3柱温：30℃。
7.3.1.4流速：1.0 ml/ min。
7.3.1.5进样量：30μl。
7.3.1.6流动相：梯度程序见表1。
7.3.2测定法
取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，按外标法，以峰面积计算。标准溶液及试样溶液中阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜和2-氨基阿苯达唑砜响应值应在仪器检测的线性范围之内。
在上述色谱条件下，标准溶液和空白组织添加试样溶液的高效液相色谱图分别见附录a。
7.4空白试验
除不加试料外，采用完（wan）全相同的步骤进行平行操作。
8结果计算和表述
试料中阿苯达唑及代谢物残留量按式(1)计算：
式中：
x——供试试料中相应的阿苯达唑及代谢物残留量，单位为微克每千克(μg/kg)；
cs——基质标准溶液中相应的阿苯达唑及代谢物标准溶液浓度，单位为微克每毫升(μg/ml)；
a——试样溶液中相应的阿苯达唑及代谢物峰面积；
v——样品定容体积，单位为毫升(ml)；
as——基质标准溶液中相应的阿苯达唑及代谢物标准溶液的峰面积；
m——供试试料质量，单位为克(g)。
注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。
9方法灵敏度、准确度和精密度
9.1灵敏度
本方法检测限：阿苯达唑为10μg/kg，2氨基阿苯达唑砜为2.5μg/kg，阿苯达唑亚砜为5μg/kg，阿苯达唑砜为0.5μg/kg。
本方法定量限：阿苯达唑为25μg/kg，2氨基阿苯达唑砜为5μg/kg，阿苯达唑亚砜为10μg/kg，阿苯达唑砜为1μg/kg。
9.2准确度
本方法阿苯达唑在25μg/kg~-500μg/kg、2氨基阿苯达唑砜在5μg/kg~ 100μg/kg、阿苯达唑亚砜在10μg/kg~200μg/kg以及阿苯达唑砜在1μg/kg~20μg/kg添加浓度水平上的回收率为70%~110%。
9.3精密度
本方法批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤15%。
详细解析高压电站截止阀的结构特点
膨化生产线的常用设备是哪些？
防爆电动球阀Q941F防爆电动不锈钢球阀使用注意事项
HDPIR保温支架尿酸酯保冷材料
果汁饮料生产线的发展前景分析
GB 29687-2013水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定
气动三通调节阀的原理
一体化污水提升泵站的作用及控制管理
插入式管道流量计安装方法步骤
【华高仪器】安捷伦Agilent气相色谱质谱仪5977C GC/MSD采购方案
碳酸锂价格跌超40%，离不开盐湖提锂等新技术推动
超声波清洗机结构介绍-洁盟超声波清洗机-机械版
赫施曼助力高效液相色谱法外标定量法
616 系列德国AVENTICS先导式比例控制阀具有哪些特征
用光照培养箱培育葡萄风信子
15吨一体化污水处理设备
维修校正CM-3500d分光测色计
腹腔镜穿刺器强度试验机 符合YY0166-2002 技术性能解析
全自动调料包装机是我们美好人生的起点
精密冷水机组成结构有哪些呢？
gb 29687-2013
食品安全国家标准
水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定高效液相色谱法
1范围
本标准规定了水产品中阿苯达唑及代谢物(2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜)残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。
本标准适用于水产品中阿苯达唑及代谢物(2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜)残留量的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可（ke）少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
gb/t 6682分析实验室用水规格和试验方法
sc/t 3016水产品抽样方法
3原理
试料中残留的阿苯达唑及代谢物，用乙酸乙酯提取，正己烷除脂，乙酸乙酯反萃取，高效液相色谱荧光检测器测定，外标法定量。
4试剂和材料
以下所用试剂，除特别注明外均为分析纯试剂，水为符合gb/t 6682规定的一级水。
4.1盐酸2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和阿苯达唑对照品：含量≥99%。
4.2正己烷：色谱纯。
4.3乙腈：色谱纯。
4.4甲醇：色谱纯。
4.5乙酸乙酯：色谱纯。
4.6二氯甲烷：色谱纯。
4.7磷酸。
4.8十二水磷酸氢二钠。
4.9庚烷磺酸钠：色谱纯。
4.10乙酸铵。
4.11 20%甲醇溶液：取甲醇80 ml，用水溶解并稀释至100 ml。
4.12 0.05 mol/l乙酸铵溶液：取乙酸铵3.85 g，用水溶解并稀释至1 000 ml。
4.13 0.04mol/l庚烷磺酸钠-磷酸溶液：取磷酸2.7ml，加水混匀，加庚烷磺酸钠8.08g，用水溶解并稀释至1 000 ml。
4.14 3%磷酸溶液：取磷酸1.75 ml，用水溶解并稀释至100 ml。
4.15 0.02 mol/l磷酸氢二钠溶液：取磷酸氢二钠0.716 g，用水溶解并稀释至100 ml，用3%磷酸溶液调节ph至8.5，现配现用。
4.16 100μg/ml阿苯达唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和2-氨基阿苯达唑砜标准贮备液：精密称取阿苯达唑、阿苯达唑砜和阿苯达唑亚砜各10mg以及盐酸2氨基阿苯达唑砜11.5mg，分别于100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为100μg/ml的标准贮备液。-18℃以下避光保存，有效期3个月。
4.17混合标准工作液：分别精密量取100μg/ml 2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和阿苯达唑标准储备液适量，于同一量瓶中，用80%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，配制成浓度分别为2-氨基阿苯达唑砜1.0μg/ml、阿苯达唑亚砜2.0μg/ ml、阿苯达唑砜0.2μg/ml以及阿苯达唑5.0μg/ml的混合标准工作液。2℃~8℃避光保存，有效期1个月。
5仪器与设备
5.1高效液相色谱仪：配荧光检测器。
5.2分析天平：感量0.000 01 g。
5.3天平：感量0.01 g。
5.4均质机。
5.5离心机。
5.6旋转蒸发器。
5.7氮吹仪。
5.8梨形瓶：100 ml。
5.9滤膜：有机相，0.45μm。
6试料的制备与保存
6.1试料的制备
取适量新鲜或冷冻的鱼，去鳞、去皮，沿脊背取肌肉；虾，去头、去壳，取肌肉部分。绞碎，并使均质。
——取均质后的供试样品，作为供试试料。
——取均质后的空白样品，作为空白试料。
——取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。
6.2试料的保存
-20℃以下保存。
7测定步骤
7.1虾、蟹类
7.1.1提取
称取试料2 g±0.02 g，于50 ml离心管中，加乙酸乙酯15 ml，均质30 s，振荡5 min，4 000 r/ min离心10 min，取上清液于100 ml梨形瓶中，残渣备用。另取一50 ml离心管，加乙酸乙酯15 ml，清洗均质机30 s，洗涤液于残渣中，振荡5 min，4 000 r/min离心10 min，上清液合并至100 ml梨形瓶中，于35℃旋转蒸发至干，用20%甲醇溶液1.0 ml溶解残渣。
7.1.2除脂
将上述溶液移入10 ml离心管中，再向梨形瓶中加入正己烷1 ml，洗涤，正己烷转入离心管中，振荡1 min，4 000 r/min离心5 min，弃正己烷层液，再加入正己烷1 ml，重复操作两次，取下层液备用。
7.1.3净化
备用液中加0.04 mol/l磷酸1 ml，混匀，加二氯甲烷1.5 ml，混合1 min，4 000 r/ min离心5 min，取二氯甲烷液于10ml离心管中，再加二氯甲烷1.5ml，重复提取两次，合并三次二氯甲烷液于10ml离心管中，于35℃氮气吹千；用0.02 mol/l磷酸氢二钠溶液1.0 ml溶解残余物，加乙酸乙酯2 ml，混合1min，4000r/min离心5min，将乙酸乙酯液移入另一10ml离心管中，再向磷酸氢二钠溶液中加乙酸乙酯2 ml，重复提取两次，合并三次乙酸乙酯液，于40℃氮气吹干，用20%甲醇-水1.0 ml溶解残留物，滤膜过滤，供液相色谱测定。
7.1.4基质匹配标准溶液的制备
称取5份空白试料2g±0.02g，于50ml离心管中，分别加入混合标准工作液0、10、25、100和200μl，混匀，按提取、除脂、净化步骤操作，基质标准溶液浓度分别为：2-氨基阿苯达唑砜0、0.01、0.025、0.1和0.2μg/ml，阿苯达唑亚砜0、0.02、0.05、0.2和0.4μg/ml，阿苯达唑砜0、0.002、0.005、0.02和0.04μg/ml，阿苯达唑0、0.05、0.125、0.5和1μg/ml，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.2鱼类
7.2.1提取
称取试料2 g±0.02 g，于50 ml离心管中，加乙酸乙酯15 ml，均质30 s，振荡提取5 min，4 000 r/min离心10 min，取上清液于100 ml梨形瓶中，残渣备用。另取一50 ml离心管加乙酸乙酯15ml，清洗均质机30s，将此液倒入上述残渣中振荡提取5min，4000r/min离心10min，上清液合并至100 ml梨形瓶中，于35℃减压旋转蒸发至千，加入20%甲醇溶液1.0 ml溶解残渣。
7.2.2除脂
将上述溶液移入10 ml离心管中，再向梨形瓶中加入正己烷1 ml，洗涤，正己烷转入离心管，振荡1 min，4 000 r/min离心5 min，去除正己烷层，再加入正己烷1 ml，依法重复操作两次。下层溶液过0.45μm有机相滤膜，供液相色谱测定。
7.2.3混合基质标准溶液的制备
称取5份空白试料2g±0.02g，于50ml离心管中，分别加混合标准工作液10、25、100和200μl，混匀按提取、除脂步骤操作，基质标准溶液浓度分别为：2-氨基阿苯达唑砜0、0.01、0.025、0.1和0.2μg/ml，阿苯达唑亚砜0、0.02、0.05、0.2和0.4μg/ml，阿苯达唑砜0、0.002、0.005、0.02和0.04μg/ml，阿苯达唑0、0.05、0.125、0.5和1μg/ ml，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.3测定
7.3.1色谱条件
7.3.1.1色谱柱：c18(150 mm×4.6 mm，粒径5μm )，或相当者。
7.3.1.2检测波长：激发波长：290 nm，发射波长：320 nm。
7.3.1.3柱温：30℃。
7.3.1.4流速：1.0 ml/ min。
7.3.1.5进样量：30μl。
7.3.1.6流动相：梯度程序见表1。
7.3.2测定法
取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，按外标法，以峰面积计算。标准溶液及试样溶液中阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜和2-氨基阿苯达唑砜响应值应在仪器检测的线性范围之内。
在上述色谱条件下，标准溶液和空白组织添加试样溶液的高效液相色谱图分别见附录a。
7.4空白试验
除不加试料外，采用完（wan）全相同的步骤进行平行操作。
8结果计算和表述
试料中阿苯达唑及代谢物残留量按式(1)计算：
式中：
x——供试试料中相应的阿苯达唑及代谢物残留量，单位为微克每千克(μg/kg)；
cs——基质标准溶液中相应的阿苯达唑及代谢物标准溶液浓度，单位为微克每毫升(μg/ml)；
a——试样溶液中相应的阿苯达唑及代谢物峰面积；
v——样品定容体积，单位为毫升(ml)；
as——基质标准溶液中相应的阿苯达唑及代谢物标准溶液的峰面积；
m——供试试料质量，单位为克(g)。
注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。
9方法灵敏度、准确度和精密度
9.1灵敏度
本方法检测限：阿苯达唑为10μg/kg，2氨基阿苯达唑砜为2.5μg/kg，阿苯达唑亚砜为5μg/kg，阿苯达唑砜为0.5μg/kg。
本方法定量限：阿苯达唑为25μg/kg，2氨基阿苯达唑砜为5μg/kg，阿苯达唑亚砜为10μg/kg，阿苯达唑砜为1μg/kg。
9.2准确度
本方法阿苯达唑在25μg/kg~-500μg/kg、2氨基阿苯达唑砜在5μg/kg~ 100μg/kg、阿苯达唑亚砜在10μg/kg~200μg/kg以及阿苯达唑砜在1μg/kg~20μg/kg添加浓度水平上的回收率为70%~110%。
9.3精密度
本方法批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤15%。
详细解析高压电站截止阀的结构特点
膨化生产线的常用设备是哪些？
防爆电动球阀Q941F防爆电动不锈钢球阀使用注意事项
HDPIR保温支架尿酸酯保冷材料
果汁饮料生产线的发展前景分析
GB 29687-2013水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定
气动三通调节阀的原理
一体化污水提升泵站的作用及控制管理
插入式管道流量计安装方法步骤
【华高仪器】安捷伦Agilent气相色谱质谱仪5977C GC/MSD采购方案
碳酸锂价格跌超40%，离不开盐湖提锂等新技术推动
超声波清洗机结构介绍-洁盟超声波清洗机-机械版
赫施曼助力高效液相色谱法外标定量法
616 系列德国AVENTICS先导式比例控制阀具有哪些特征
用光照培养箱培育葡萄风信子
15吨一体化污水处理设备
维修校正CM-3500d分光测色计
腹腔镜穿刺器强度试验机 符合YY0166-2002 技术性能解析
全自动调料包装机是我们美好人生的起点
精密冷水机组成结构有哪些呢？