大鼠elisa试剂盒的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。下面上海研域生物普及大鼠elisa试剂盒样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,大鼠elisa试剂盒应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择edta或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用pbs(ph7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的pbs,ph7.4。大鼠elisa试剂盒用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的pbs(ph7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可 将标本放于 -20 ℃保存,但 应 避免反复冻融 .
7. 不能检测含nan3的样品 ,大鼠elisa试剂盒因nan3抑制辣根过氧化物酶的(hrp)活性。
大鼠elisa试剂盒操作步骤:
标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100 μ l,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50 μ l,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100 μ l分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50 μ l,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50 μ l弃掉,再各取50 μ l分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50 μ l分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50 μ l,混匀后从第七、第八孔中分别取50 μ l加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50 μ l,混匀后从第九第十孔中各取50 μ l弃掉。(稀释后各孔加样量都为50 μ l,浓度分别为1800ng/l,1200ng/l ,600ng/l,300ng/l, 150ng/l )。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、 待测样品孔 。大鼠elisa试剂盒在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40 μ l,然后再加待测样品10 μ l(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁, 轻轻 晃动 混匀 。
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