植物树叶总蛋白组织样品处理方法
植物树叶总蛋白组织样品处理方法
对多数从动物或植物组织里提取总蛋白质而言，同样没有一种通用的程序。但遵循的原则基本相同。下面列出两种提取植物树叶总蛋白程序：
裂解液制备：
（a）,7m urea,2m thiourea,4%(w/v)chaps,40mm tris-base,40mm dtt,2%pharmalyte ph3-10.
（b）,905m urea, 2%(w/v)chaps, 0.8%(w/v)pharmalyte ph3-10,1%(w/v)dtt and 5mm pefabloc proteinase inhibitor;
三氯醋酸-苯酮沉淀法提取植物树叶总蛋白程序：
先将植物树叶置于液氮中速冻，后放置于gd200组织研磨仪中研碎；悬浮于含10%三氯醋酸和0.07%β-巯基乙醇的丙酮溶液，-20℃冰浴；让蛋白质沉淀过夜然后离心（4℃，40，000g,1h）,弃上清液；重悬沉淀浮于含0.07% β-巯基乙醇的冰预冷丙酮溶液里；离心（4℃，40，000g,1h）后真空干燥沉淀；用（a）或（b）裂解溶液溶解沉淀，离心（4℃，40，000g,1h）；brandford法定量蛋白，然后分装保存在-78℃备用
超速离心法：
取材；用gd200组织研磨仪在液氮冷冻条件下将样品研成粉末，每1g样品加入0.5ml裂解液，使用gd200高通量组织研磨仪研磨匀浆30s；组织悬液15℃，10,000×g离心10min；上清液4℃，150,000×g超速离心45min；小心避开上层漂浮的脂质层，吸取离心上清6℃40,000g再次离心50min;取离心上清。brandford法定量蛋白，分装后置-75℃保存。
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