科研抗体的制备操作与注意要素

抗体(antibody),(免疫球蛋白不仅仅只是抗体)是一种由浆细胞(效应b细胞)分泌,被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型y形蛋白质,仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中,及其b细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个*特征,该外来目标被称为抗原。
抗体的制备过程:
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如bsa、ova、has等。
2. 免疫动物
常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
抗体的操作注意要素:
每次试验前应列出详细试验计划,其中包含试验意图、拟用方法、所用一抗和二抗的品种和效价、预施行的操作流程计划以及预期试验结果等。试验分组编号用玻璃笔标记在玻片上,对每一抗体均应配以阳性和阴性对照。关于抗体的操作过程要素:
1.抗体分装购人的浓缩型抗体,为防止重复冻融而失效,一般需要分装在多个安瓿中,依据需要量,每安瓿含10一20ra。除留一支现用,其余应立即放置低温冰箱内贮存(-20℃以下)。用时取一支。以免长期保存在4℃冰箱内失效。
2.无菌与消毒保持使用中的抗体无菌是困难的,但是与抗体接触的东西如滴管、吸管、试管、安瓿以及加样器等通过消毒,尽量削减污染的时机.不然抗体极易污染细菌与真菌,然后敏捷发生浑浊沉积而失效。
3.抗体稀释一般按其作业浓度稀释,如1:100、1:1000等,然后用旋涡器混匀液体。剩余的抗体可保存在斗℃冰箱内.尽量在1—2个月内用完,而不 要放在0℃以下。不然抗体会很快结冰,重复冻融可使抗体效价急剧下降。关于抗体的稀释液,在夏天温度很高时,参加少许防腐剂如叠氮钠或柳硫汞等,以免在切片上效果时间超过10小时而生真菌。
关键词:防腐剂

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