振荡烧瓶试验
1 原 理
在液体中通过快速长时间振荡， 增加微生物与抗（抑）菌产品内抑菌剂的接触以显示其抑菌作用。试验根据抑菌率大小判断其是否具有抑菌能力。本试验适用于对非溶出性抗（抑）菌织物的抗（抑）菌效果鉴定。
2 实验器材
（1）实验菌株 *（atcc 6538）、大肠杆菌（8099）、白色念珠菌（atcc 10231） 菌悬液的制备方法见2.1.2。根据抑菌剂特定用途也可用其他菌悬液
（2）磷酸盐缓冲液（pbs，0.03mol/l，ph值7.2）
（3）振荡摇床 （300r/min）
（4）三角烧瓶
（5）营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基（tsa）与沙堡琼脂培养基
3 操作程序
（1）将抗菌物品剪切成 10mm×10mm 样片，称取 0.75g 2份分别置入 250ml 的三角烧瓶中。
（2）在上述三角烧瓶中加入 70ml pbs和 5ml菌悬液，使菌悬液在pbs中的浓度为1×104cfu/ml～5×104cfu/ml。
（3）将三角烧瓶固定于振荡摇床上，在作用温度为 20℃～25℃ 的条件下，以300r/min分别振摇 2min、1h。吸取 1.0ml 用pbs作适当稀释至10-2，作为试验组振荡前样液。
（4）分别吸取振荡前和振荡后样液及适当稀释度的稀释液各 1.0ml，以琼脂倾注法接种平皿，每个样液接种2个平皿，按照2.1.3规定的方法进行活菌培养计数。
（5）试验同时设阴性对照样片和不加样片组。对照样片组以不含抗菌剂的材质、大小相同的样片代替抗菌样片外， 其它操作程序均与实验组相同。 不加样片组分别取 5ml菌悬液和 70ml pbs加入 250ml 三角烧瓶中，混匀，分别于振荡前和振荡后 1h，各取 1.0ml 菌悬液与pbs的混合液做适当稀释。同上，按2.1.3法进行活菌培养计数。
（6）以试验同批次的稀释液、培养基分别设阴性对照。
（7）试验重复3次，按下式计算抑菌率
抑菌率=（样品振荡前平均菌落数-样品振荡后平均菌落数）/样品振荡前平均菌落数×100%
4 评价规定
（1）各次试验阴性对照均应无菌生长。
（2）不加样片组活菌计数在 1×104cfu/ml～5×104cfu/ml之间， 且样本振荡前后平均菌落数差值在 10% 以内， 试验有效。
（3）各次试验中，试验样片抑菌率与对照样片抑菌率的差值菌＞26%， 即判定该产品具有抗菌作用。
5 注意事项
振荡前须将振荡摇床上的三角烧瓶固定牢，以免碰破。
试验中，在实验误差允许的范围内，如果试验组和对照组出现振荡后菌落数高于振荡前 菌落数的情况，其抑菌率可按“0”计算。
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（1）实验菌株 *（atcc 6538）、大肠杆菌（8099）、白色念珠菌（atcc 10231） 菌悬液的制备方法见2.1.2。根据抑菌剂特定用途也可用其他菌悬液
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（4）三角烧瓶
（5）营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基（tsa）与沙堡琼脂培养基
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（1）将抗菌物品剪切成 10mm×10mm 样片，称取 0.75g 2份分别置入 250ml 的三角烧瓶中。
（2）在上述三角烧瓶中加入 70ml pbs和 5ml菌悬液，使菌悬液在pbs中的浓度为1×104cfu/ml～5×104cfu/ml。
（3）将三角烧瓶固定于振荡摇床上，在作用温度为 20℃～25℃ 的条件下，以300r/min分别振摇 2min、1h。吸取 1.0ml 用pbs作适当稀释至10-2，作为试验组振荡前样液。
（4）分别吸取振荡前和振荡后样液及适当稀释度的稀释液各 1.0ml，以琼脂倾注法接种平皿，每个样液接种2个平皿，按照2.1.3规定的方法进行活菌培养计数。
（5）试验同时设阴性对照样片和不加样片组。对照样片组以不含抗菌剂的材质、大小相同的样片代替抗菌样片外， 其它操作程序均与实验组相同。 不加样片组分别取 5ml菌悬液和 70ml pbs加入 250ml 三角烧瓶中，混匀，分别于振荡前和振荡后 1h，各取 1.0ml 菌悬液与pbs的混合液做适当稀释。同上，按2.1.3法进行活菌培养计数。
（6）以试验同批次的稀释液、培养基分别设阴性对照。
（7）试验重复3次，按下式计算抑菌率
抑菌率=（样品振荡前平均菌落数-样品振荡后平均菌落数）/样品振荡前平均菌落数×100%
4 评价规定
（1）各次试验阴性对照均应无菌生长。
（2）不加样片组活菌计数在 1×104cfu/ml～5×104cfu/ml之间， 且样本振荡前后平均菌落数差值在 10% 以内， 试验有效。
（3）各次试验中，试验样片抑菌率与对照样片抑菌率的差值菌＞26%， 即判定该产品具有抗菌作用。
5 注意事项
振荡前须将振荡摇床上的三角烧瓶固定牢，以免碰破。
试验中，在实验误差允许的范围内，如果试验组和对照组出现振荡后菌落数高于振荡前 菌落数的情况，其抑菌率可按“0”计算。
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