细胞铁离子检测试剂盒操作步骤
细胞铁离子检测试剂盒操作步骤
铁是一种化学元素，为晶体，它的化学符号是fe ，原子序数是26，在化学元素周期表中位于第4周期、第viii 族，是铁族元素的代表。是常用的金属。它是过渡金属的一种，是地壳含量第二高的金属元素。
原理：
铁与蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，再被还原剂还原成二价铁， 并与亚铁嗪生成紫红色化合物，在 540-580nm 处可比色测定。
适用范围：该试剂盒可用于培养细胞中铁离子定量检测。
操作步骤：
1. 样品准备（以 24 孔板为例）：
将含铁元素 dmem 培养过的细胞用冷的 pbs 2ml 洗两遍，将 pbs 吸弃（若不马上检测可将 其冻存于-20℃）。200ul/孔裂解液裂解细胞，置于摇床裂解 2h。
2. 标准品的稀释：用试剂盒提供的稀释用液将 3mm 的标准品母液稀释为：300 um、150um、
75um、37.5um、18.75um、9.38um、4.69um。注意倍比稀释并设置 0 浓度对照反应管。
3. 将缓冲液与 4.5%kon溶液按 1:1 混匀，称为混液 a。
4. 参考下表使用 1.5ml 离心管，设置空白对照管、标准品管和样品管。如果样品中的铁元素含量过高，用裂解液适当稀释后再进行测定。
5. 混匀，60℃ 孵育 1h。
6. 冷却至室温，将管盖与管壁上的液滴离心入管底。
7. 加入 30ul 铁离子检测剂，混匀，室温孵育，30min。
8. 取 200ul 于 96 孔板，在 550nm 测定吸光度。如果不能测定 550nm，也可以在 540nm~580nm 范围内检测。
9. 绘制标准曲线并计算铁离子浓度。
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