戴安并联色谱技术在生化蛋白样品及单克隆 抗体分析中的应用
生物制药是生物技术产业中发展zui为迅速的部分，以单克隆抗体药物为 标志，目前已批准35个抗体药物上市，用于癌症、自身免疫、黄斑变 性、血液病和感染治疗等[1]。在生物制药的每个生产环节，产品的纯化和分 析过程都至关重要。早期抗体的质量控制过程中，必须测定样品的效价、聚 集体和电荷亚型。单克隆药物（mab）产品中两个主要的杂质是电荷亚型单 抗和单抗聚集体，这些副产物会产生与主产品不同的药效，有时会引起严重 的副作用，如抗药性抗体的形成。蛋白聚体是在生产过程、纯化或者运输过 程中产生（如温度，ph的影响）。本文讨论了采用一套hplc系统（ultimate 3000钛系统）同时实现单克隆抗体的聚集体的分离和电荷亚型的分离。
测试条件 仪器：ultimate 3000钛系统，包括带有在线脱气 单元的双三元梯度泵；带有生物兼容的十通阀；wps- 3000t（b）fc分析型，带样品收集功能的自动进样器； 紫外检测器（uv）；二极管阵列检测器（dad）。系统 连接见图1。 离子交换色谱（iec右泵） thermo scientific mabpac scx -10（4 mm i.d. ×250 mm ）色谱柱阳离子交换模式分离单克隆抗体的电 荷亚型
色谱条件： 流动相a：20 mm mes缓冲盐，60 mm nacl ，ph5.6 流动相b：20 mm mes缓冲盐，300 mm nacl ， ph5.5 梯度分离条件：30 min内15-45%b；6 min 100%b清 洗；10 min 15%b平衡 流速：1.0 ml/min 检测波长：280 nm 温度：30 ℃
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