抗体纯化的原理和步骤详解
抗体纯化是指从抗血清（pab）、腹水或杂交瘤细胞系（mab）细胞培养上清液中提取抗体的过程。纯化后的抗体适用于多种应用。该过程可以在提供抗体纯化服务的实验室中进行，如果有必需的设备和工具，也可以自行纯化。如研究人员担心原始研究的完整性受到破坏，可在实验室中进行纯化，确保研究快速进行。
抗体的主要来源之一是在动物体内生成的抗血清。在这种情况下，反复向动物体内注射抗原，直到抗体开发完成为止，其血液用于制备抗血清，经纯化后可获得多克隆抗体。抗体的另一个来源是克隆细胞，其作为相同细胞群的一部分生成抗体；这种方法用于大规模生产单克隆抗体。
抗体纯化的原理：
抗体纯化用于从血清中分离多克隆抗体，或从腹水或培养上清液中分离单克隆抗体。我们可以采用多种方法纯化抗体，可纯化从粗制到具有高度特异性的抗体。
利用制备好的抗原使动物产生免疫反应，随后生成结合这种抗原的特异性抗体。从血清或杂交瘤细胞系（从免疫动物组织中制备）中纯化的抗体可直接用于（或在用酶或荧光标记物标记后）蛋白免疫印迹、elisa等抗原检测及多种其他应用。单克隆抗体纯化工艺通常涉及捕获、中间纯化和精纯等两步或三步纯化方法。
抗体纯化的步骤：
step 1 捕获
亲和层析
从初始样品中（细胞原液）分离抗体，这步骤主要是中和ph上样，低ph洗脱的，把单抗从培养液中快速地捕获出来的最关键步骤，此步骤可以去除大量的hcp，单抗去折叠片段，病毒及hcd和培养基组分物质。
step 2 中间纯化
强阳离子离子交换层析（结合/洗脱模式）
阳离子交换层析在纯化工艺中起着非常重要的作用，可以达到很好的去除杂质效果，进一步去除hcp，脱落的proteina，抗体聚集体，片段及其他异构体。
step 3 精纯
强阴离子交换层析（流穿模式）
大部分单抗pi值大于7，在中和ph上样条件下大部分蛋白带正电荷，流穿下来，这步操作不仅能去除杂质蛋白，聚集体，内毒素，最重要的是能去除病毒，更进一步提高药物安全性。因大部分病毒在ph>7缓冲条件下带负电荷，可以和带正电荷的季铵阳离子结合，从而达到消除病毒的作用。
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