正常情况下,液相色谱仪进样阀不会出现保留时间不重复的现象,主要是峰高和峰面积重复性不理想。
在正常操作的情况下,进样阀的重复性:1部分充填技术,rsd=0.2%~2%,取决于进样重复性;2*充满技术,0.05%~1%,取决于定量环的体积。输送5倍于定量环体积的样品溶液的进样精度为0.1%。另外峰高和面积的重复性也取决于流速的稳定性、流动相的组成和色谱柱的温度等,因此通常rsd偏大。
进样准确度与进样体积密切相关。进样阀的准确度:1部分充填方式,0.2%~2%,取决于进样阀和操作者的技术;2*充满方式,5%~30%,取决于定量环,因为定量环的体积为额定体积,管径有0.001的公差,实际体积会有所差异。大体积(2ml)定量环的准确度大约为5%,中等体积定量环(20μl)约为10%,小体积定量环(5μl)约为30%。要知道确切的体积,需要校准定量换并考虑进样阀内部管路因素。
当进样阀进样体积为定量环体积的50%~200%时,精度较差。在进行部分充填时,进样体积超过50%,就会有部分样品溶液从放空管中漏出,漏出体积具有不确定性。*填充时,注射体积小于200%,就会有大量样品溶液残留在定量环内,而且体积是变化的,尤其是当进样体积和进样流速不协调时。
除了进样阀故障外,有许多其他原因也会导致重复性问题。流速改变会导致保留时间和峰高,峰面积也会受到影响,但非常微小。流动相组成改变会导致保留时间和峰高度不可重新,峰面积相对不受影响。温度改变会导致保留时间、面积和峰高度不可重现。
关键词:液相色谱仪 色谱柱
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