小鼠组织蛋白酶b(ctsb)elisa检测试剂盒
试剂盒性能
1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数r值,大于等于0.9900。
2.灵敏度:检测浓度小于10.0 u/l。
3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5.贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6.有效期:6个月使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(elisa)。往预先包被组织蛋白酶b(ctsb)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、hrp标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物tmb显色,tmb在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的组织蛋白酶b(ctsb)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(od 值),计算样品活性。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:edta、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1.酶标仪(450nm)
2.高精度加样器及枪头:0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.37℃恒温箱
操作注意事项
1.试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶*溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3.浓度为0的s0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称
96孔配置
48孔配置
备注
微孔酶标板
12孔×8条
12孔×4条
无
标准品
0.3ml*6管
0.3ml*6管
无
样本稀释液
6ml
3ml
无
检测抗体-hrp
10ml
5ml
无
20×洗涤缓冲液
25ml
15ml
按说明书进行稀释
底物a
6ml
3ml
无
底物b
6ml
3ml
无
终止液
6ml
3ml
无
封板膜
2张
2张
无
说明书
1份
1份
无
自封袋
1个
1个
无
注:标准品(s0-s5)浓度依次为:0、250、500、1000、2000、4000 u/l
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1.手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
2.自动洗板机:每孔注入洗液350μl,浸泡1min,洗板5次。
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μl;
3.样本孔先加待测样本10μl,再加样本稀释液40μl;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(hrp)标记的检测抗体100μl,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物a、b各50μl,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μl,15min内,在450nm波长处测定各孔的od值。
结果判断
绘制标准曲线:在excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应od值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
小鼠组织蛋白酶b(ctsb)elisa检测试剂盒
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断
关键词:酶标仪 恒温箱 洗板机 水浴锅
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