柱前衍生是在经过分析柱前使分析物与衍生剂反应,反应产物在分析柱上实现分离,实际分离的是衍生产物,检测的也是衍生产物;柱后衍生是分离物在分析柱中实现分离后,在衍生池内与衍生剂反应,在柱子中分离的是目的物,在检测器处检测的衍生产物。
柱前衍生优点是,对设备要求不高,可以手工衍生,而且对衍生时间要求相对宽泛。缺点是,引入了过多的物质,如:衍生剂、衍生产物(当然这个是检测需要的)和衍生副产物,对柱子有潜在的负面影响,另如采用手工衍生也会引入过多的认为因素。
柱后衍生优点是,重现性好,认为因素少,引入物质比较少。缺点是,可能有扩散问题,在柱子中分离结束后,就存在扩散,如果衍生慢(必然流速低)、管路长扩散问题就会比较严重,再有就是要求有一套外源的泵系统和一个检测池,对于设备要求较高。
柱后衍生又称柱后反应,利用衍生反应使被测物与相应的试剂分析反应,以改变其物理或化学性质,使其被检测到。
柱后衍生系统的注意事项:
1、保持流动相和贮液器的清洁,并定期清洗;
2、流动相(水应为纯水和色谱纯试剂)并经过滤脱气;
3、启动时流量要由小渐大,避免压力的骤然升;
4、应使用液相进样针,并经常冲洗进样阀;
5、保持检测器的清洁,每次分析完后连同柱子一道冲洗,用缓冲盐作流动相时,必须用水冲洗干净,再逐步过渡到有机溶剂;
6、色谱柱必须保存在有机溶剂中;
7、上机样品必须经过滤处理;
8、系统长期关闭情况下hplc泵和柱后衍生系统泵均需用水/甲醇混合液至少冲洗系统30min,再保存到纯甲醇里。
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