牛结节性皮肤病抗体（LSD-Ab）ELISA检测试剂盒使用说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断
牛（bovine）结节性皮肤病抗体（lsd-ab）
elisa检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（elisa）。往预先包被结节性皮肤病抗原的包被微孔中，依次加入标本、hrp标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物tmb显色，tmb在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（od 值），与cutoff值相比较，从而判定标本中结节性皮肤病抗体（lsd-ab）的存在与否。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：edta、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.37℃恒温箱
操作注意事项
1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.预处理后的样本请按照操作步骤用样本稀释液适当稀释以达到试剂盒的的最佳检测效果。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称
96孔配置
48孔配置
备注
微孔酶标板
12孔×8条
12孔×4条
无
阴性对照
0.5ml
0.5ml
无
阳性对照
0.5ml
0.5ml
无
检测抗原-hrp
10ml
5ml
无
20×洗涤缓冲液
25ml
15ml
按说明书进行稀释
样本稀释液
6ml
3ml
无
底物a
6ml
3ml
无
底物b
6ml
3ml
无
终止液
6ml
3ml
无
封板膜
2张
2张
无
说明书
1份
1份
无
自封袋
1个
1个
无
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μl，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μl；
3.待测样本孔先加待测样本10μl，再加样本稀释液40μl；
4.随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（hrp）标记的检测抗原100μl，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μl，15min内，在450nm波长处测定各孔的od值。
结果判断
1. 试验有效性：阳性对照孔od值平均值≥1.00；
阴性对照孔od值平均值≤0.15。
2. 临界值（cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
3. 阴性判断：样品od值＜临界值（cut off），样品为阴性
4. 阳性判断：样品od值＞临界值（cut off），样品为阳性
试剂盒性能
1.准确性：阳性对照孔od值平均值≥1.00；阴性对照孔od值平均值≤0.15，说明试验结果有效。
2.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
3.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
4.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
5.有效期：6个月
从2011年开始我们致力于在生命科学领域、生物医学实验外包及论文润色服务，协助客户各类实验服务及论文润色十多年，是您值得信赖的科研合作伙伴!
如果您受时间、试验条件等限制而无法完成您的课题研究，欢迎您与我们联系。
实验代做服务：
免疫组化ihc染色实验服务
细胞、组织tunel凋亡染色实验服务
试剂盒免费代检测
实验室代做实验项目
透射电镜服务实验服务
石蜡/冰冻切片tunel凋亡
核仁组成区嗜银-agnor染色实验服务
免疫共沉淀（chirp）实验
rna结合蛋白免疫沉淀（rip）实验代做
酶联免疫（elisa）技术服务
鸡传染性法氏囊病病毒vp2抗体诊断试剂盒
喹诺酮类快速检测试剂盒
组织芯片/微阵列定制技术服务
染色质免疫沉淀分析(clip)实验服务
多因子液相芯片技术（luminex）实验
免疫细胞化学icc实验服务
atp/adp检测实验服务
蛋白双向(2-d)电泳实验服务
蛋白相互作用分析
碱性磷酸酶染色实验服务
pkc活性检测实验
非标定量实验
（label-free）
dige技术实验服务
端粒酶活性检测实验
细胞生长曲线的测定
扫描电镜服务
nf-kb p65活性检测实验
慢病毒包装实验服务
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样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：edta、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.37℃恒温箱
操作注意事项
1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.预处理后的样本请按照操作步骤用样本稀释液适当稀释以达到试剂盒的的最佳检测效果。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称
96孔配置
48孔配置
备注
微孔酶标板
12孔×8条
12孔×4条
无
阴性对照
0.5ml
0.5ml
无
阳性对照
0.5ml
0.5ml
无
检测抗原-hrp
10ml
5ml
无
20×洗涤缓冲液
25ml
15ml
按说明书进行稀释
样本稀释液
6ml
3ml
无
底物a
6ml
3ml
无
底物b
6ml
3ml
无
终止液
6ml
3ml
无
封板膜
2张
2张
无
说明书
1份
1份
无
自封袋
1个
1个
无
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μl，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μl；
3.待测样本孔先加待测样本10μl，再加样本稀释液40μl；
4.随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（hrp）标记的检测抗原100μl，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μl，15min内，在450nm波长处测定各孔的od值。
结果判断
1. 试验有效性：阳性对照孔od值平均值≥1.00；
阴性对照孔od值平均值≤0.15。
2. 临界值（cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
3. 阴性判断：样品od值＜临界值（cut off），样品为阴性
4. 阳性判断：样品od值＞临界值（cut off），样品为阳性
试剂盒性能
1.准确性：阳性对照孔od值平均值≥1.00；阴性对照孔od值平均值≤0.15，说明试验结果有效。
2.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
3.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
4.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
5.有效期：6个月
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蛋白相互作用分析
碱性磷酸酶染色实验服务
pkc活性检测实验
非标定量实验
（label-free）
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