RNA提取的注意事项有哪些?

rna是目前发现细胞内生物功能zui丰富多样的生物大分子,同时是dna与蛋白质信息传递的桥梁,因此完整rna的提取和纯化是功能基因组时代的重要手段。那么你知道rna提取的注意事项都有哪些吗?让我们一起来看看吧!
一、如何保存提取出的rna?
提取后溶解于rnase-free water中,rna样品建议立即进行下游实验,如需储存,建议分装保存于-80℃。避免多次取用样品,反复冻融。
二、为什么提取的rna有降解?
1.使用的组织材料不新鲜。提取rna应采用新鲜的组织材料,或将新鲜组织材料用液氮迅冻后置于-80℃保存。
2.提取rna时使用的试剂及耗材中混有rnase。
3.提取的组织材料中含有大量内源rnase。
三、rna分离过程中水相与有机相分离不wan全,提取的rna含量低。
可能是氯仿混合不充分,离心时转速不够或离心时间太短。使得回收的rna水相低于500 µl。
四、如何防止提取rna过程中rna的降解?
1.实验过程中使用的玻璃器皿使用前可于180 ℃干烤8 h以上,塑料制品要用氯仿冲洗。焦磷酸二乙酯(depc)是rnase的强烈抑制剂,rna提取过程和逆转录过程中所用的水用depc处理;
2.实验人员的手为rnase的重要污染源,进行rna实验时应始终戴手套,并应勤换手套;
3.提取的样品材料应尽可能新鲜,如果不能及时提取rna,取样后应保存于液氮中。
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