糖原合成酶(GCS)试剂盒微量法测定步骤

糖原合成酶(glycogen synthase,gcs)试剂盒测定原理:gcs催化udpg和葡萄糖残基生成糖原和udp,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化nadh氧化生成nad+,在340nm下测定nadh下降速率,即可反映gcs活性。
测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、 工作液的配制:临用前将试剂三和试剂四转移到试剂一中混合溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
3、 试剂五的配制:临用前在试剂五中加入1ml试剂二充分溶解待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
4、 将工作液和试剂五置于37℃预热5分钟。
5、 在1ml微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本、10μl试剂五和180μl工作液,立即混匀,记录340nm处初始吸光值a1和1min后的吸光值a2,计算δa=a1-a2。
注意:在该试剂盒中,若δa大于0.1,需将样本用提取液稀释适当倍数后测定,使δa小于0.1可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
测定意义:
gcs(ec 2.4.1.11)催化udpg和葡萄糖残基生成糖原和utp,以α-1,4-糖苷键相连延长糖链,是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,是胰岛素作用的主要靶酶,对糖代谢的调节和血糖稳态的维持具有重要作用。
关键词:分光光度计 酶标仪

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