层浪流式笔记——肺癌PD-1免疫检查
实验简介
pd-1，全称为“程序性死亡受体1”，又称为cd279，是一种重要的免疫抑制分子。pd-1主要功能是下调免疫系统对人体细胞的反应、抑制t细胞炎症活动，调节免疫系统并促进自身耐受。pd-1发挥功能可以预防自身免疫性疾病，但也会阻止免疫系统攻击癌细胞，造成肿瘤进展。通过流式细胞技术检测pd-1表达，可以反映肿瘤进展情况。多项研究显示，pd-1在肿瘤患者的外周血cd8+t细胞表面过表达，并与患者的病理变化及临床疗效密切相关。cd8+pd-1+t 细胞在癌患者外周中的比例明显增加,且晚期患者的cd8+pd-1+ t细胞水平高于早期癌患者,由此提示pd-1分子在癌患者外周血cd8+ t 细胞中的应答水平发生改变,并与患者疾病的进展密切相关。
实验材料与方法
检测方法：
样本制备：
1. 消化酶制备单细胞悬液，并过滤；
2. 裂解红细胞，1 ml 1x rbc裂解红细胞,室温10 min(根据厂家推荐)；
3. 清洗：加入1 ml染色缓冲液，350g，离心5 min，弃上清；
4.可重复步骤3；
5. 染色：根据厂家推荐用量进行染色，室温避光孵育20 min；
6. 清洗：加入1 ml染色缓冲液，350g，离心5 min，弃上清；
7.加入200-300 ul染色缓冲液，重悬后上机检测。
实验结果：
数据结果
圈门逻辑：
肿瘤组织中先圈出白细胞的信号cd45+（图a），再圈总的cd3+t细胞（图b），再分别看cd4（图c）、cd8（图d）、nk和nkt（图e）在淋巴细胞中的占比，最重要的是看pd-1在淋巴的cd3+t细胞的双阳信号（图f）。肿瘤组织中淋巴细胞的占比会下降，特别是发展到后期，白细胞整体降低，pd-1在cd3+t中信号明显。pd-1在cd8+t细胞中表达水平较低。
结果分析总结：
肿瘤组织中，淋巴细胞亚群倾向百分比降低、分群不明显，但是此次检测t细胞分群基本明显。
关于层浪生物
层浪聚焦流式细胞领域，致力于实现流式技术系统化、自动化、智能化，在临床领域推动流式技术的常规化，在科研领域推进国产流式标准化。目前已推出多款流式产品：2激光8色流式细胞仪于2021年初成功获得nmpa注册证；科研型产品3激光14色流式细胞仪fongcyte™上市一年，仪器性能获得客户的高度认可；临床型产品3激光14色流式细胞仪longcyte™26种型号均获ce认证。公司核心团队均在流式技术领域有10余年经验，十年如一日专注流式技术研究，致力于研发生产稳定、可靠、性能优异的产品。层浪未来将陆续推出更多流式产品，为中国的流式技术发展尽绵薄之力，做行业中流式技术普及者，做客户信赖的流式伙伴，为中国的临床和科研事业助飞。
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1. 消化酶制备单细胞悬液，并过滤；
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3. 清洗：加入1 ml染色缓冲液，350g，离心5 min，弃上清；
4.可重复步骤3；
5. 染色：根据厂家推荐用量进行染色，室温避光孵育20 min；
6. 清洗：加入1 ml染色缓冲液，350g，离心5 min，弃上清；
7.加入200-300 ul染色缓冲液，重悬后上机检测。
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结果分析总结：
肿瘤组织中，淋巴细胞亚群倾向百分比降低、分群不明显，但是此次检测t细胞分群基本明显。
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