Topoisomerase I 助力5min完成克隆
拓扑异构酶(topoisomerase) 是存在于细胞核内的一类酶，它们能够切断单链或双链dna的磷酸二酯键，然后重新缠绕和封口来更正dna连环数，从而控制dna的拓扑状态。dna拓扑异构酶分为两类，i型dna拓扑异构酶（dna topoisomerase i）和ii型dna拓扑异构酶(dna topoisomerase ii）。topoisomerase i是由美国科学家stewart shuman在1990年从牛痘病毒中发现的，同时具有限制性内切酶活性和连接酶活性，能够在dna复制过程中切断并重新连接dna。topoisomerase i可以在无需atp供能的情况下切断dna链，在切割单链dna后，会与末端dna片段形成暂时性中间体，并在释放压力后重新连接切口。由于topoisomerase i具有切断、连接dna的这种特性，常被用于克隆载体的构建（如topo克隆）以及ngs 建库中的接头连接等。
图1. topoisomerase i原理图[1]
topo克隆topo克隆是一种基于topoisomerase i的pcr产物快速克隆系统，利用topoisomerase i的连接原理，无需dna连接酶，可在5 min内高效连接dna片段。topoisomerase i识别并切割topo载体上的结合位点，切割完成后，与topo载体结合形成复合物。目的dna片段可在topoisomerase i的作用下与topo载体连接，形成克隆。技术路线
识别切割：topoisomerase i识别dna序列5’-(c/t)cctt-3’，并且能够在该位点对dna进行切割；
固定：topoisomerase i借助dna断裂的能量将酪氨酸残基与载体dna 3’末端形成共价键，从而固定在dna载体上；
连接：在加入目的dna片段（pcr product）后，目的dna片段的5'端羟基攻击载体片段的磷酸键，释放能量，使得目的dna片段的 5'端羟基与载体片段的3'端磷酸基团连接在一起；
脱落：topoisomerase i从载体分子上脱落。
图2.topo原理图
翌圣topoisomerase i翌圣topoisomerase i(cat#14971es)由翌圣镁孚泰生物zymeeditor酶进化平台经过重组表达获得，无外切酶残留、低宿主残留，可应用于ngs 建库中的接头连接、topo克隆等！
部分数据展示01
应用到topo克隆，克隆效果优于a品牌
使用不同批次的topoisomerase i进行topo克隆，分别连接2 kb的粘性末端、4 kb的平末端，实验结果表明，翌圣topoisomerase i运用到topo克隆中，克隆效果优于a品牌，阳性克隆率达100%（8/8）。
图3. topoisomerase i运用到topo克隆效果图
02外切酶残留
将50 u不同批次的topoisomerase i分别与相应的底物dna在37℃孵育4 h，琼脂糖凝胶电泳检测结果表明，翌圣topoisomerase i无外切酶残留。
图4. 外切酶残留检测
03e.coli基因组dna残留<1 copy/5u
对不同批次的topoisomerase i(cat#14971es)进行e.coli基因组dna残留检测，结果显示翌圣topoisomerase i宿主基因组dna残留远低于1 copy/5u。
图5. e.coli基因组dna残留检测
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产品名称
产品货号
产品规格
topoisomerase i
14971es
100 / 500 u
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连接：在加入目的dna片段（pcr product）后，目的dna片段的5'端羟基攻击载体片段的磷酸键，释放能量，使得目的dna片段的 5'端羟基与载体片段的3'端磷酸基团连接在一起；
脱落：topoisomerase i从载体分子上脱落。
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图3. topoisomerase i运用到topo克隆效果图
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