细胞实验验证基因功能
一、实验材料：疾病对应的细胞系（或者是原代细胞），预算充足情况下可以选择2种细胞系，暂定为：a和b细胞
二、实验方案：敲低两种细胞的目的基因1、过表达两种细胞的目的基因1（若是mirna可以使用mimics、inhibitor）
三、干扰片段筛选：2种细胞都需要筛选（当用mimics和inhibitor时也需要初步筛选表达效果）
目的基因1干扰片段筛选：针对目的基因1设计并合成3条sirna及nc，转染细胞，qpcr筛选出干扰 的片段进行后续实验；
四、实验分组：a或b细胞
a
a+sirna nc对照组
a+sirna目的基因1干扰
a+过表达目标基因1
a+过表达空载
抑制剂处理浓度1
五、检测项目：
细胞增殖或者细胞毒性检测（cck法/mmt），
流式检测细胞周期，
流式检测细胞凋亡，
细胞侵袭实验（transwell），迁移、划痕
wb检测细胞信号通路中蛋白的表达变化，
qpcr检测信号通路中基因的表达，
免疫荧光检测下游信号通路蛋白
流式多色检测某些marker指标
coip检测a和b蛋白是否结合
双荧光素酶检测a和b是否结合
油红o染色
生化检测：sod，cat等
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