D-萤光素宝典在手，生物发光检测无忧！
一，d-萤光素的作用原理
d-萤光素 (d-luciferin) 是萤火虫萤光素酶 (firefly luciferase) 的化学发光底物。在atp 和萤光素酶存在下，萤光素能够被氧化发光。当萤光素过量时，发光亮度与萤光素酶浓度呈正相关。通过萤光素/萤光素酶生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因表达、肿瘤生长、药物反应等。
二，游离态和盐形式的d-萤光素，怎么选？
目前市面上主要有 3 种 d-萤光素，d-萤光素游离酸 (hy-12591a)、钠盐 (hy-12591) 和钾盐 (hy-12591b)。d-萤光素钠盐、钾盐易溶于水，而游离酸形式难溶于水，需要适当的碱中和才能溶于水。配成溶液后，这 3 种形式的 d-萤光素生物活性相当。
三，外生物发光、体内活体成像的检测怎么操作？
以d-萤光素钾盐为例：
1、体外生物发光检测 (in vitro bioluminescent assays)
1) 将细胞铺在 24 孔黑孔板上，铺板密度为 0.5-2.0×105 个细胞/孔，37℃，培养过夜。
2) 用超纯水配制 15 mg/ml 的 d-萤光素储存液 (100×)。
注：d-萤光素溶液最好现用现配，也可分装后-20℃ 避光冻存，有效期 1 个月。
3) 用预热好的细胞培养基 1: 100 稀释储存液，配制终浓度 150 μg/ml 的 d-萤光素工作液 (1×)。
4) 去除培养细胞的培养基直至无残留。
5) 向细胞内添加 1×d-萤光素工作液后，立即进行图像分析。
2、小鼠活体成像分析 (in vivo analysis in mice)
1) 用无菌的 dpbs (no mg2+、ca2+) 配制 15 mg/ml 的 d-萤光素溶液，0.2 μm 滤膜过滤除菌。
注：d-萤光素溶液最好现用现配，也可分装后 -20℃ 避光冻存，有效期 1 个月。
2) 按 150 mg/kg 剂量和 10 μl/g 注射体积向每支小鼠注射相应量的 15 mg/ml d-萤光素溶液。
3) 腹腔或静脉注射 5-15 min 后进行活体成像分析。
四，逐典d-萤光素钾盐优势
1.高纯度（hplc验证纯度≥99%)
2.优异的生物发光性能
3.高溶解度（>40mg/ml)
五，客户之声
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二，游离态和盐形式的d-萤光素，怎么选？
目前市面上主要有 3 种 d-萤光素，d-萤光素游离酸 (hy-12591a)、钠盐 (hy-12591) 和钾盐 (hy-12591b)。d-萤光素钠盐、钾盐易溶于水，而游离酸形式难溶于水，需要适当的碱中和才能溶于水。配成溶液后，这 3 种形式的 d-萤光素生物活性相当。
三，外生物发光、体内活体成像的检测怎么操作？
以d-萤光素钾盐为例：
1、体外生物发光检测 (in vitro bioluminescent assays)
1) 将细胞铺在 24 孔黑孔板上，铺板密度为 0.5-2.0×105 个细胞/孔，37℃，培养过夜。
2) 用超纯水配制 15 mg/ml 的 d-萤光素储存液 (100×)。
注：d-萤光素溶液最好现用现配，也可分装后-20℃ 避光冻存，有效期 1 个月。
3) 用预热好的细胞培养基 1: 100 稀释储存液，配制终浓度 150 μg/ml 的 d-萤光素工作液 (1×)。
4) 去除培养细胞的培养基直至无残留。
5) 向细胞内添加 1×d-萤光素工作液后，立即进行图像分析。
2、小鼠活体成像分析 (in vivo analysis in mice)
1) 用无菌的 dpbs (no mg2+、ca2+) 配制 15 mg/ml 的 d-萤光素溶液，0.2 μm 滤膜过滤除菌。
注：d-萤光素溶液最好现用现配，也可分装后 -20℃ 避光冻存，有效期 1 个月。
2) 按 150 mg/kg 剂量和 10 μl/g 注射体积向每支小鼠注射相应量的 15 mg/ml d-萤光素溶液。
3) 腹腔或静脉注射 5-15 min 后进行活体成像分析。
四，逐典d-萤光素钾盐优势
1.高纯度（hplc验证纯度≥99%)
2.优异的生物发光性能
3.高溶解度（>40mg/ml)
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