葡聚糖凝胶指的是由一定平均相对分子质量的葡聚糖(dextran) 和甘油基以醚桥形式相互交联而成,具有立体网状结构,应用面广的一类凝胶,国外商品名为sephadex。交联度的大小,可通过控制交联剂(一般为环氧氯丙/烷) 和葡聚糖的配比以及反应条件来控制。物理化学性质化学稳定性葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂(除非它被化学降解)。它在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的,在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。长期接触氧化剂将破坏凝胶,因而应避免使用。物理稳定性葡聚糖凝胶并不熔融,可以在湿态、中性ph进行灭菌或在高压灭菌器120℃、30分钟而不影响它的色谱性质。干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。方法分类1.乙醇浸泡:在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干;2.无盐水浸泡:室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶溶胀,然后;
3.盐酸浸泡:在常温下再用0.2nhcl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗至中性;4.将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层;5.上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的ph值等于上柱的buffer的ph值);6.凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在40-50cm以下,过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制,脱盐时高径比为5:1即可;7.洗脱方法:可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱buffer中加入nacl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以分离纯化;8.在位清洗(cip)凝胶使用十次后作一次cip,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1m氢氧化/钠反向洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
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