原理:将待测细胞经特异性荧光染料染色后放入样品管中,在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,形成细胞柱。流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束,垂直照射在样品流上,被荧光染色的细胞在激光束的照射下,产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测,这种信号基本上反映了细胞体积的大小;荧光信号的接受方向与激光束垂直,经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离,形成多个不同波长的荧光信号。流式细胞仪检测哪些项目:
1、流式细胞仪可以检测细胞结构,包括:细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、dna含量与细胞周期、rna含量、蛋白质含量。
2、流式细胞仪可以检测细胞功能,包括:细胞表面/ 胞浆/核的特异性抗原、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点和细胞受体。
3、流式可以检测的样本很多:
①细胞表面的蛋白,通过荧光抗体直接标记。
②细胞内部的蛋白,细胞固定,通透后再用荧光抗体识别。
③细胞内部的dna含量,细胞固定,通透后加dna染料。
④细胞内部钙离子浓度,直接加钙离子浓度荧光染料染色。
⑤细胞内部线粒体膜电位,比如jc-1,罗丹明染料。
⑥使用微球阵列,可以同时检测溶液中数十种可溶性蛋白的浓度。
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